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厚德求是

木虫 (著名写手)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-29 19:01:40
一方面可能是你PCR过程出现问题,一般用Dpn1消化之前,先跑电泳,看看有没有大概大小正常的条带,如果有的话再去做转化。
另一方面可能是感受态细胞的问题。建议把模板质粒也导入JM109做平行对照。
11楼2014-07-12 14:54:53
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-29 19:01:29
引用回帖:
8楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2010-11-03 14:31:59
先请教个问题,DpnI消化的目的是什么?还有我查了NEB的说明书,DpnI只有在识别位点被甲基化后才可以切割,通过PCR方法扩出来的产物是完全不会被甲基化的,所以你的这一步消化一点作用都没有。如果鉴定PCR产物是否正 ...

DPNI的作用就是把你的模板消化掉

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
12楼2014-07-12 23:14:35
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yuqianswim

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般用的质粒都是经过细菌增殖的,细菌里面都有甲基化的酶,所以一般链接上目的片段的重组载体可以被DpnI消化掉,而定点突变用的是PCR的方法,这样扩增的重组质粒是不被甲基化的,所以不能被切掉。所以,PCR之后再用DpnI消化就可以去掉模板的重组质粒,进而可以在挑去克隆的时候排除掉挑取假阳性的可能性。
13楼2015-05-29 10:47:06
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