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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


什么蛋白不保存在蛋白保存液中都会变质沉淀。
11楼2010-10-12 13:36:01
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jingcp200320

银虫 (小有名气)


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如果你NI柱纯化完成后没有透析,可能析出的是咪唑等盐类,我透析好之后放在4度基本没有问题!
12楼2010-10-12 16:10:04
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三妹妹

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by jingcp200320 at 2010-10-12 16:10:04:
如果你NI柱纯化完成后没有透析,可能析出的是咪唑等盐类,我透析好之后放在4度基本没有问题!

在37度孵育了15分钟,沉淀不溶解;
将沉淀混合物转入透析袋PBS透析,沉淀不溶解;
取上清测蛋白浓度,浓度很低,看来沉淀是蛋白;
将沉淀用8M的尿素溶解,PBS透析,沉淀又回来了...
这次的蛋白被我折腾了个够呛

呵呵,下次我可要记住纯化后就透析,还要加保护剂了
13楼2010-10-13 15:22:56
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zh_sheng

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
估计是蛋白变性了,建议LZ 以后纯化完透析后再保存
14楼2010-10-13 16:16:48
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jingcp200320

银虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by jingcp200320 at 2010-10-12 16:10:04:
如果你NI柱纯化完成后没有透析,可能析出的是咪唑等盐类,我透析好之后放在4度基本没有问题!

建议你重新纯化新的裂解蛋白液吧,反复折腾蛋白肯定不好了,你纯化好之后,马上透析过夜,然后保存肯定没有问题。
15楼2010-10-14 09:40:41
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-07 00:41:31
楼主的蛋白质可能是冷敏性蛋白质,在低温下折叠状态发生了改变,并且暴露出来疏水面,引起各个蛋白质分子之间的疏水表面彼此接触以降低自由能,导致蛋白质聚合,这样的聚合恢复到常温不能自发的解除,因此变性。
一般尿素引起的蛋白质变性溶解时,蛋白质的部分二级结构还是存在的,因此用层析或者透析去掉尿素后,变性的蛋白质多数还是能够恢复到天然状态。
16楼2014-04-26 20:37:31
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-07 00:41:37
又是蛋白质冷变性时会引起二硫键断裂,到室温后,由于空气中的氧气存在会使得巯基重新连接,如果蛋白质的三级结构不是天然状态,那么可能有错误的二硫键形成,因此建议在加入尿素时同时加入巯基乙醇,然后用透析、超滤或层析一瓶去除掉。
17楼2014-04-26 20:41:38
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

引用回帖:
12楼: Originally posted by jingcp200320 at 2010-10-12 16:10:04
如果你NI柱纯化完成后没有透析,可能析出的是咪唑等盐类,我透析好之后放在4度基本没有问题!

不会降解吗
Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
18楼2014-04-28 10:05:03
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haze12344

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们的做法是冻成干粉,用的时候再溶解就好了,这样可以长期存于-80℃
生物你好
19楼2015-02-11 12:00:35
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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20楼2015-09-25 21:25:01
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