应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】镍柱纯化的蛋白保存在-20度一个星期，拿出来都是沉淀？？
202/2返回列表上一页12
查看: 4287  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
什么蛋白不保存在蛋白保存液中都会变质沉淀。
赞一下 回复此楼
11楼2010-10-12 13:36:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jingcp200320

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果你NI柱纯化完成后没有透析，可能析出的是咪唑等盐类，我透析好之后放在4度基本没有问题！
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2010-10-12 16:10:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三妹妹

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jingcp200320 at 2010-10-12 16:10:04:
如果你NI柱纯化完成后没有透析，可能析出的是咪唑等盐类，我透析好之后放在4度基本没有问题！

在37度孵育了15分钟，沉淀不溶解；
将沉淀混合物转入透析袋PBS透析，沉淀不溶解；
取上清测蛋白浓度，浓度很低，看来沉淀是蛋白；
将沉淀用8M的尿素溶解，PBS透析，沉淀又回来了...
这次的蛋白被我折腾了个够呛

呵呵，下次我可要记住纯化后就透析，还要加保护剂了
赞一下 回复此楼
13楼2010-10-13 15:22:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh_sheng

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计是蛋白变性了，建议LZ 以后纯化完透析后再保存
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2010-10-13 16:16:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jingcp200320

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by jingcp200320 at 2010-10-12 16:10:04:
如果你NI柱纯化完成后没有透析，可能析出的是咪唑等盐类，我透析好之后放在4度基本没有问题！

建议你重新纯化新的裂解蛋白液吧，反复折腾蛋白肯定不好了，你纯化好之后，马上透析过夜，然后保存肯定没有问题。
赞一下(2人) 回复此楼
15楼2010-10-14 09:40:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-07 00:41:31
楼主的蛋白质可能是冷敏性蛋白质，在低温下折叠状态发生了改变，并且暴露出来疏水面，引起各个蛋白质分子之间的疏水表面彼此接触以降低自由能，导致蛋白质聚合，这样的聚合恢复到常温不能自发的解除，因此变性。
一般尿素引起的蛋白质变性溶解时，蛋白质的部分二级结构还是存在的，因此用层析或者透析去掉尿素后，变性的蛋白质多数还是能够恢复到天然状态。
赞一下 回复此楼
16楼2014-04-26 20:37:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-07 00:41:37
又是蛋白质冷变性时会引起二硫键断裂，到室温后，由于空气中的氧气存在会使得巯基重新连接，如果蛋白质的三级结构不是天然状态，那么可能有错误的二硫键形成，因此建议在加入尿素时同时加入巯基乙醇，然后用透析、超滤或层析一瓶去除掉。
赞一下 回复此楼
17楼2014-04-26 20:41:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫
引用回帖:
12楼: Originally posted by jingcp200320 at 2010-10-12 16:10:04
如果你NI柱纯化完成后没有透析，可能析出的是咪唑等盐类，我透析好之后放在4度基本没有问题！

不会降解吗
回复此楼
Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
18楼2014-04-28 10:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们的做法是冻成干粉，用的时候再溶解就好了，这样可以长期存于-80℃
赞一下 回复此楼
生物你好
19楼2015-02-11 12:00:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
20楼2015-09-25 21:25:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 三妹妹 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 281求调剂 +9 觉得好的吧 2026-04-10 9/450 2026-04-10 22:16 by 猪会飞
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 一志愿0703化学招61最终排名62化学求调剂 +24 招61排名62 2026-04-07 28/1400 2026-04-10 16:15 by yx54321
[论文投稿] mdpi小修rvr时间四五天了 20+3 哈哈high 2026-04-08 5/250 2026-04-10 16:02 by 北京莱茵润色
[考研] 285求调剂 +9 AZMK 2026-04-07 11/550 2026-04-10 15:24 by AZMK
[考研] 292求调剂 +9 笑笑袁 2026-04-09 9/450 2026-04-10 10:05 by LHGeng
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-05 11/550 2026-04-10 09:32 by 钟洲2011
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[考研] 267求调剂 +5 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 5/250 2026-04-09 18:47 by stone_128
[考研] 262求调剂 +10 天下第一文 2026-04-04 13/650 2026-04-09 15:16 by 探123
[考研] 0860004 求调剂 309分 +7 Yin DY 2026-04-08 7/350 2026-04-09 14:06 by ditto77778
[考研] 0703调剂，一志愿天津大学319分 +23 haaaabcd 2026-04-05 26/1300 2026-04-08 16:19 by luoyongfeng
[考研] 265求调剂 +19 小木虫085600 2026-04-06 21/1050 2026-04-08 10:38 by 逆水乘风
[考研] 生物医药调剂｜SCI中科院三区一作+多项科研成果 +8 likangxing 2026-04-07 11/550 2026-04-08 00:02 by lys0704
[考研] 0854求调剂 +9 亨氏番茄沙司 2026-04-06 10/500 2026-04-07 14:37 by shdgaomin
[考研] 307求调剂 +3 Youth@@ 2026-04-07 3/150 2026-04-07 09:25 by 小黑不怕难
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:16 by 南航~万老师
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 5/250 2026-04-05 15:52 by jndximd
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭