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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】镍柱纯化的蛋白保存在-20度一个星期，拿出来都是沉淀？？
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
什么蛋白不保存在蛋白保存液中都会变质沉淀。
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11楼2010-10-12 13:36:01
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jingcp200320

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果你NI柱纯化完成后没有透析，可能析出的是咪唑等盐类，我透析好之后放在4度基本没有问题！
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12楼2010-10-12 16:10:04
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三妹妹

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jingcp200320 at 2010-10-12 16:10:04:
如果你NI柱纯化完成后没有透析，可能析出的是咪唑等盐类，我透析好之后放在4度基本没有问题！

在37度孵育了15分钟，沉淀不溶解；
将沉淀混合物转入透析袋PBS透析，沉淀不溶解；
取上清测蛋白浓度，浓度很低，看来沉淀是蛋白；
将沉淀用8M的尿素溶解，PBS透析，沉淀又回来了...
这次的蛋白被我折腾了个够呛

呵呵，下次我可要记住纯化后就透析，还要加保护剂了
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13楼2010-10-13 15:22:56
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zh_sheng

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计是蛋白变性了，建议LZ 以后纯化完透析后再保存
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14楼2010-10-13 16:16:48
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jingcp200320

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by jingcp200320 at 2010-10-12 16:10:04:
如果你NI柱纯化完成后没有透析，可能析出的是咪唑等盐类，我透析好之后放在4度基本没有问题！

建议你重新纯化新的裂解蛋白液吧，反复折腾蛋白肯定不好了，你纯化好之后，马上透析过夜，然后保存肯定没有问题。
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15楼2010-10-14 09:40:41
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-07 00:41:31
楼主的蛋白质可能是冷敏性蛋白质，在低温下折叠状态发生了改变，并且暴露出来疏水面，引起各个蛋白质分子之间的疏水表面彼此接触以降低自由能，导致蛋白质聚合，这样的聚合恢复到常温不能自发的解除，因此变性。
一般尿素引起的蛋白质变性溶解时，蛋白质的部分二级结构还是存在的，因此用层析或者透析去掉尿素后，变性的蛋白质多数还是能够恢复到天然状态。
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16楼2014-04-26 20:37:31
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-07 00:41:37
又是蛋白质冷变性时会引起二硫键断裂，到室温后，由于空气中的氧气存在会使得巯基重新连接，如果蛋白质的三级结构不是天然状态，那么可能有错误的二硫键形成，因此建议在加入尿素时同时加入巯基乙醇，然后用透析、超滤或层析一瓶去除掉。
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17楼2014-04-26 20:41:38
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫
引用回帖:
12楼: Originally posted by jingcp200320 at 2010-10-12 16:10:04
如果你NI柱纯化完成后没有透析，可能析出的是咪唑等盐类，我透析好之后放在4度基本没有问题！

不会降解吗
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Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
18楼2014-04-28 10:05:03
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haze12344

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们的做法是冻成干粉，用的时候再溶解就好了，这样可以长期存于-80℃
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生物你好
19楼2015-02-11 12:00:35
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
20楼2015-09-25 21:25:01
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