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angel4219

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 844355
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性别: GG
专业: 光谱分析

[交流] 【求助】100金币求助MTT实验方案优化！！

A植物粗提物
B用EP管称取
C用1mlDMSO溶解
D取1微升溶解液溶于细胞培养液
E用针头式滤器过滤上述含药培养母液
F取1.5ml母液加1.5ml新鲜培养液于15ml离心管中混合
G取F中混合培养液1.5ml再加1.5ml新鲜培养液于15ml离心管中混合
H重复f、g的步骤直到配成6个浓度梯度
I消化细胞，加入4ml培养液吹打。吹打均匀（约30次）
J细胞计数（细胞密度40万/ml）
K取一定体积的细胞母液于15ml离心管中
L取新鲜培养液稀释K中母液至细胞浓度为5万/ml
M 用1ml移液枪继续吹打120次左右
N倒出M中培养液于排枪加样槽
O 用排枪取100微升接种于96孔培养平板
P 培养16小时（细胞约占平板面积的60%）
Q 加入H中6个已经配好的药液于96孔平板中
R培养48小时
S 加入5微克/ml的MTT
T 放入培养箱中4小时
U吸出孔中液体加入200ul的DMSO
V 放入酶标仪中于490nm处检测
W记录实验结果

我的实验步骤如上。现在的实验结果每次测出来都不尽如人意（因为这个粗提物是在美国的实验室做过抗肿瘤活性筛选的。）主要是IC50相差几百倍！求教各位虫友。对于各位的建议，我将发金币于感谢！多谢大家提出宝贵意见！

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