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【求助】液相 流动相检测问题？ 已有1人参与
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PP-HPLC无法分开 研究对象是动物组织的一种分子量约为10KD的蛋白（通过 SDS-PAGE检测判定的分子量，尚未鉴定无法确定该蛋白是否有报道），具体分离纯化过程所用的是酸性缓冲液，目的是通过RP-HPLC纯化得到高纯度的样品进行鉴定。有空白运行梯度排除了梯度峰，Simadzu VP-ODS C18,4.6×150mm ,5μm柱子。1ml/min 流动相A:0.1%TFA 水溶液，流动相:0.08%TFA 乙腈溶液。10%A 平衡5min,30min内梯度到60%B。延长梯度时间、更换长柱子均无法得到很好的分离。改善梯度条件（在10%A 平衡5min,55min内梯度到60%B，90%B 5min 10%A 5min）峰型同前，降低进样浓度，换长柱子也没有改善。 |
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