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djn880607

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】PCR产物的条带在2000bp以上，为什么？已有2人参与

我做的是RAPD PCR，用6个随机引物扩增菌的DNA，结果条带在2000bp以上，且呈同一水平线，像总DNA的位置，是什么原因呢？

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1楼 2010-09-27 19:25:27

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小小豆豆

金虫 (小有名气)

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专业: 临床免疫学检验

pcr时是如何设定步骤的啊

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2楼2010-09-27 19:33:41

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djn880607

新虫 (初入文坛)

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PCR反应体系                               25ul
10xbuffer（含MgCl2）                      2.5ul
dNTP （10mM）                         0.4ul
随机引物                                  0.5ul
rTaq（5U/ul）                            0.2ul
模板DNA                               2.5ul
ddH2O                                  21.4ul

PCR扩增程序：
94 °C                         5 min
94 °C                         1 min
36 °C                         2 min
72 °C                         2 min
72 °C                         7 min
4 °C                            ∞

步骤2~4重复40个循环

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3楼2010-09-28 18:59:57

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