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解析血细胞分析仪直方图
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有些自动血细胞分析仪的报告单附带有细胞直方图，那么这些图有什么用，能提供什么临床的信息呢？在国内，大多数医师都不甚了了，一般都不看的，也看不懂。在以前人工做的时代，在报告RBC、WBC、PLT、Hb等参数的时代，还附带了诸如：RBC大小、分布等等形态学的报告，但进入自动化时代这些形态学的报告就不再出现在报告中了，因此许多医生很不习惯，总是要求做手工，但实际上在目前几乎所有的报告中都能出关于血细胞的一些形态特征，而细胞直方图就是其中的一种报告方式。 怎样解读细胞直方图呢？首先，我们要知道什么是直方图。直方图是统计学上常用的来表示样本各组在成分布的一种直观的图表。如图1所示：X轴表示体积单位，Y轴表示个数（即统计学的频数），柱条表示在某个体积段内的物体个数。当我们将体积段无限细分下去方块图就会变成曲线图，如同我们的报告单上的一样。图2＿S1表示的是常见血细胞分析仪的红细胞直方图：曲线的每个点对应的坐标（X，Y）表示X体积的红细胞有Y个，而曲线与X轴围成的范围表示的是红细胞的总数（对于数学模型而言，就是曲线的定积分）。图中显示了两个峰，A峰体积小，峰值也小是PLT（血小板）峰，B峰体积较在，峰值高，显示RBC（红细胞）峰。而A、B峰的面积显示了RBC和PLT的总量，峰值的X坐标显示了RBC和PLT体积大小，峰宽显示了RBC和PLT体积的极差（极差可不是特别差^O^,而是统计学中常用来表示离散程度的指标，即一组观察值中，最大值和最小值之差）。峰的面积越大表示总量越多，峰越宽表示体积大小差异越大，即大小分布不均。曲线向左移（如S2），即表示，RBC和PLT的体积较小，曲线向右移，即表示，RBC和PLT的体积较大。因此通过红细胞分布直方图，再结合Hb、MCH、MCVH等指标就能知道，是不是贫血，是大细胞正色素性贫血（缺铁？），还是小细胞低色素性贫血（缺叶酸？）、以及大小分布状况（地海贫？）等临床诊治信息。 同理，白细胞分布直方图 （图3）也一样。在图3＿a中前一峰是淋巴细胞峰，后一峰是中性粒细胞峰，a1、a2显示了不同大小的粒细胞图。具体分析同红细胞分布图。 直方图能很直观的看出血分析中的各类指标，但因为只能给人一个感性的认识，对于单独一张报告单，就很难知道这个分布是不是正常，因此有许多血细胞分析仪用了RDW（红细胞分布宽度）PDW（血小板分布宽度）等指标来反映直方图的信息，本人认为更贴合于临床。 血液细胞（血常规）检验中的几点注意事项 血细胞检验是指对血液中白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）、血红蛋白（HGB）及相关数据的计数检测分析，也称血常规检验。血常规检验不仅是诊断各种血液病的主要依据，而且对其它系统疾病的诊断和鉴别也可提供许多重要信息，是临床医学检验中最常用、最重要的基本内容之一。血常规检验的最原始的手段是通过显微镜人工镜检，随着基础医学的发展，高科学技术的应用，血液细胞分析仪已成为取代镜检进行血常规分析的重要手段，尤其是带分类的血液分析仪。 无论是镜检、还是使用血液分析仪，要获得血常规检验的稳定可靠、准确的数据，防止临床诊疗作出错误的判断，实验室检验要充份考虑影响血常规检验中的多种影响因素，并严格加以控制： 一、标本的采集 为了取得准确、可靠的检验结果，必须取得高质量的标本。高质量的标本是高质量检验的第一步。保证血液标本中各项细胞的完整形态是作为血常规检验用的高质量的标本的最基本的要求。血液细胞检验标本的制备分为采集和抗凝2个步骤。 1、标本的采集 按采血部位的不同，取得血常规检验标本，最常用的途径是静脉采血和末梢毛细血管采血。各类文献均表明，静脉血血样是最可靠的标本，手指血是末梢毛细血管血样中与静脉血差异最小且较为稳定的血样。有研究表明，与静脉血相比，手指血的准确性和可重复性仍然较差：白细胞计数明显高（+8%）而血小板计数明显低（-9%）。因此，绝大多数专家建议：血常规检验特别是应用血液分析仪时，应使用静脉血。 2、标本的抗凝 用于血常规检验的血样必须经抗凝剂抗凝处理，在目前的众多抗凝剂中，EDTA盐（EDTA-Na2，EDTA-K2，EDTA-K3）是对白细胞形态和血小板影响相对较小的抗凝剂，最适合用于血常规检验。除采血因素的影响（生理性因素、采血部位等）外，多数情况下，血样的质量取决于血液和抗凝剂的比例。血液比例过高时，由于抗凝剂相对不足，血浆中出现微凝血块的可能性增加，在用于血细胞分析仪时，微凝血块可能阻塞仪器，同时影响一些检验指标。血液比例过低，抗凝剂相对过剩，对检验指标会造成严重影响。血液经EDTA抗凝后，白细胞的形态会发生改变，这种改变和时间及EDTA浓度有关。EDTA的最佳浓度（与血液比）为1.5mg/ml，如果血样少，EDTA的浓度达到2.5mg/ml，中性粒细胞肿胀、分叶消失，血小板肿胀、崩解、产生正常血小板大小的碎片，这些改变都会使血常规检验和血细胞计数得出错误结果。这一点在用自动血细胞分析仪时尤为重要。 静脉血和末梢血均可经抗凝剂抗凝成全血标本（标本中不含稀释液，或对标本造成的稀释的影响极小），显而易见，末梢血抗凝标本要达到合适的血液和抗凝剂的比例是非常困难的。因此，多数专家建议，在制备全血标本时，应使用定量的含EDTA盐的真空采血管采集静脉血。 无论镜检，或是使用血液细胞分析仪，由于绝大多数的对标本稀释的稀释液中含有抗凝剂，在一定量的稀释液中可直接加入微量静脉血或末梢血液（10-40μl）即可制备成通常所说的预稀释标本。多数情况下，预稀释标本的制备适用于末梢血的血样。 二、标本的稀释 血液是由血细胞和血浆两部分组成的红色粘稠混悬液。在进行血细胞检验计数时，直接用血液计数是困难的，无论是镜检还是用血细胞分析仪，血液均需合适准确的稀释后才能进行血细胞的检验计数。基于血细胞分析仪的基本原理，在血细胞分析仪的设计应用中，稀释倍数和计数容量是最重要的设计指标之一。 自50年代初，美国库尔特先生研制了电阻抗法（小孔原理）血细胞分析仪以来，血细胞的稀释液为介质的流动的形式通过传感器测量计数（如图-1），血细胞通过传感器时一定需要排队通过，否则可能就会造成重合损失（如图-2）。 图-1 正常计数 图-2重合计数 实际应用时，是将血液稀释于稀释液中形成稀释标本（稀释比为1：N），以流动检测的方式测出一定量（V）的稀释标本内的血细胞数（T），经换算后得出血液中的细胞浓度（L）：L-T×N/V。 由此可见，准确合理的稀释倍数（在用于仪器时，RBC、PLT的稀释倍数一般为1：10000至1：30000；WBC、HGB的稀释倍数一般为1：250左右）和准确、稳定的测量容量是血细胞检测的又一重要基础。稀释倍数过低，会形成细胞排队通过传感器的重合缺损；稀释倍数过大，则会造成一定测量容量内血细胞的数量过少，这都会严重影响血液细胞检验的测量精度。 三、标本的储存 如前文所述，抗凝剂因时间和浓度的不同，会造成对血细胞形态的影响。有研究表明，用EDTA抗凝静脉血标本，在标本收集后的5分钟内或30分钟后，8小时内（室温）检测，可以得到最佳的检测结果。如果不需要血小板和白细胞分类的准确数据，则标本可以在2℃-8℃的条件下存放至24小时。 预稀释标本一般需要在标本制备后10分钟内予以测量；如果稀释液中添加细胞稳定剂，预稀释标本的存放时间也不可超过4小时。 总之，影响血常规检验结果的因素很多，要想取得准确的检验数据，就要在实验的每一个步骤中都严格按照操作规程进行。本文所讲述的内容，仅仅是对血常规检验中注意事项的部分总结，可能存在的不足和缺陷，还是请常年处于临检一线工作中的老师们批评、指 |
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