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【资源】HPLC常见问题原因及解决方案！ 已有1人参与
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HPLC常见问题原因及解决方案 一）压力异常 操作压力的变化往往是故障的征兆。 A、没有压力显示，没有流动相流动： 原 因 解决方法 1、电源问题 接通电源，开机 2、保险丝被烧坏 更换保险丝 3、控制器设定不正确或设定失败 采取恰当的设定、、修理或更换控制器 4、柱塞杆折断 更换柱塞杆 5、泵头内有空气 溶剂脱气、启动泵抽出空气 6、流动相不足 补充流动相、更换入口滤头 7、单向阀损坏 更换单向阀 8、漏液 拧紧或更换手紧接头 B、流动相流动正常，但没有压力显示： 原 因 解决方法 1、仪表损坏 更换仪表 2、压力传感器损坏 更换压力传感器 C、压力持续偏高 原 因 解决方法 1、流速设定过高 调整流速设定 2、柱前筛板堵塞 反冲色谱柱、更换筛板、更换色谱柱 3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀 使用恰当的流动相、冲洗柱塞杆。 4、色谱柱选择不当 选择恰当的色谱柱 5、进样阀损坏 清洗或更换进样阀 6、柱温过低 提高温度 7、控制器失常 修理或更换控制器 8、保护柱阻塞 清洗或更换保护柱 9、在线过滤器阻塞 清洗或更换在线过滤器 D、 压力持续偏低： 原 因 解决方法 1、流速设定过低 调整流速 2、系统漏液 确定漏液位置并维修 3、色谱柱选择不当 选择恰当的色谱柱 4、柱温过高 降低温度 5、控制器失常 维修或更换控制器 E、 压力波动： 原 因 解决方法 1、泵中有气体 溶剂脱气、从泵中除去气体 2、单向阀损坏 更换单向阀 3、泵密封损坏 更换泵密封 4、脱气不充分 重新过滤一遍、溶剂脱气 5、系统漏液 确定漏液位置并维修 6、使用梯度洗脱 由于流动相粘度的变化引起的压力波动 二） 漏 液 通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。 A）接头处漏液 原 因 解决方法 1、接头松动 拧紧 2、接头磨损 更换 3、接头过紧 拧松，再重新拧紧、更换 4、接头被污染 拆下清洗、更换 5、部件不匹配 使用同一品牌的配件 B）泵漏液 原 因 解决方法 1、单向阀松动 拧紧单向阀（不必拧的过紧）、更换单向阀。 2、接头松动 拧紧接头（不必拧的过紧） 3、混合器密封损坏 更换混合器密封、更换混合器。 4、泵密封损坏 维修或更换泵密封件 5、压力传感器损坏 维修或更换压力传感器 6、脉冲阻尼器损坏 更换脉冲阻尼器 7、比例阀损坏 检查隔膜，如果漏液立即更换、检查手紧接头，损坏的立即更换 8、放空阀的损坏 拧紧放空阀、更换放空阀 C）进样阀漏液 原 因 解决方法 1、转子密封损坏 重新安装或更换进样阀 2、定量环阻塞 更换定量环 3、进样口密封松动 调整 4、进样针头尺寸不合适 使用恰当的进样针 5、废液管中产生虹吸 保持废液管高于废液液面 6、废液管阻塞 更换或疏通废液管 D）色谱柱漏液 原 因 解决方法 1、尾端接头松动 拧紧接头 2、卡套内有填料 拆下、清洗卡套、重新安装 3、筛板厚度不合适 使用合适的筛板 E）检测器漏液 原 因 解决方法 1、流通池垫片损坏 更换垫片、避免过大的背景压力（压力降） 2、流通池窗破碎 更换窗口 3、手紧接头漏液 拧紧或更换 4、废液管阻塞 更换废液管 5、流通池阻塞 重新安装或更换 三）谱图问题 液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。 A）峰拖尾 原 因 解决方法 1、筛板阻塞 反冲色谱柱、更换进口筛板、更换色谱柱 2、色谱柱塌陷 填充填料至色谱柱中 3、干扰峰 改变流动相或更换色谱柱 4、流动相PH选择错误 调整PH值，一般在3-7 5、样品与填料表面的溶化点发生反应 加入离子对或碱性修饰剂、更改色谱柱 6、柱外效应 调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）使用小体积的流通池 7、二级保留效应，反相模式 加入三乙胺（碱性样品）、加入乙酸（或酸性样品）、加入盐缓冲剂（离子化样品）换柱 8、缓冲液不合适 使用浓度20-100mM的缓冲液、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液 B）峰前延 原 因 解决方法 1、柱温低 升高柱温，一般为25-40度，不得超过60度 2、样品溶剂选择不恰当 使用流动相作为样品溶剂 3、样品过载 降低样品含量 4、色谱柱损坏 更换新柱 C）峰分叉 原 因 解决方法 1、分析柱污染 可能是柱子污染，再生；入口可能被阻塞，拆下来清洗必要时更换色谱柱。 2、样品溶剂不溶于流动相 采取流动相作为样品溶剂。 D）峰变形 原 因 解决方法 1、样品过载 减少样品载量 2、样品溶剂选择不恰当 减少进样体积、运用低极性样品溶剂 E）额外的峰 原 因 解决方法 1、样品中有其他组份 正常 2、前一次进样的洗脱峰 增加运行时间或梯度斜率、提高流速 3、空位或鬼峰 检查流动相是否纯净、使用流动相作为样品溶剂、减少进样体积 F）保留时间波动 原 因 解决方法 1、温控不当 调好柱温 2、流动相组分变化 防止变化（蒸发、反应等） 3、色谱柱没有平衡 在运行前给予足够的时间平衡色谱柱 4、流速变化 重新设定流速 5、泵中有气泡 从泵中除去气泡 3、流动相选择不恰当 更换合适的流动相、选择合适的混合流动相 G）基线漂移 原 因 解决方法 1、柱温波动。 控制好柱子和流动相的温度 2、流动相不均匀或纯度不高 使用HPLC级的溶剂、高纯度的盐及添加剂、重蒸水、流动相在使用前进行脱气 3、流通池被污染或有气体 用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池 4、检测器出口阻塞 取出阻塞物或更换管子 5、流动相配比不当或流速变化 更改配比或流速 6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时 更改流动相时，平衡半小时 7、流动相污染、变质 检查流动相的组成、重新配制 8、样品中有强保留的物质以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。 重新用水及甲醇清洗柱，除去强留份。 10、检测器没有设定在最大吸收波长处。 将波长调整至最大吸收波长处 H）基线噪音 原 因 解决方法 1、在流动相、检测器或泵中有空气 流动相脱气。强极性溶剂冲洗系统除去气。 2、漏液 检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。 3、流动相混合不完全 用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂 4、温度影响（柱温过高） 减少差异、稳定时间长一点 5、在同一条线上有其他电子设备 检查干扰是否来自于外部，加以更正。 6、泵振动 在系统中加入脉冲阻尼器 7、流动相污染、变质或由低质溶剂配成 检查流动相的组成。 8、流动相各溶剂不相溶 选择互溶的流动相 9、检测器/记录仪电子元件的问题 断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。 10、流通池污染 清洗流通池 11、检测器灯能量不足 更换灯 12、色谱柱填料流失或阻塞 更换色谱柱 13、流动相混合不均匀或混合器工作不正常 维修或更换混合器 I）宽峰 原 因 解决方法 1、流动相组成变化 重新制备新的流动相 2、流动相流速太低 调节流速 3、漏液（特别是在柱子和检测器之间） 检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。 4、检测器设定不正确 调整设定 5、柱外效应影响：柱子过载；检测器对反应时间或池体积响应过大；柱与检测器间管路太长或管路内径太大 小体积进样、减少响应时间或使用更小的流通池、使用内径为0.007-0.01的短管路、减少响应时间 6、缓冲液浓度太低 增加浓度 7、色谱柱污染或失效，塔板数较低 更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。 8、柱入口塌陷 打开柱入口，填补塌陷或更换柱子 9、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰 选择其它类型的色谱柱以改善分离效果 10、柱温过低 提高柱温。温度不宜超过60℃ 12、检测器时间常数太大 使用较小的时间常数 J）所有的峰面积都太小 原 因 解决方法 1、检测器衰减设定过高或过低 减少或增加衰减的设定 2、检测器时间常数设定太大 设定较小的时间常数 3、进样量太少或太多 增大或减少进样量 4、记录仪连接不当 使用正确的连接 四）进样阀的问题 以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。 A）手动进样阀，转动不灵 原 因 解决方法 1、转子密封损坏 更换或调整转子密封 2、转子太紧 调整转子的松紧度 B）手动进样阀，载样困难 原 因 解决方法 1、进样阀安装不当 重新安装 2、定量环阻塞 清洗或更换定量环 3、进样器污染 清洗或更换进样器 4、管路阻塞 清洗或更换管路 |
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jiangshuxun
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