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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教连接转化方面的问题
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-10-12 23:25:41
如果用的是3‘平末端的就用平末端能连上的酶，或者给片段加个A再做克隆，克隆不长斑因素很多的啦，不过我们原来做的时候如果不是单一的条带是肯定不会往下做克隆的。
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11楼2010-10-09 10:46:28
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xinmucong123

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-10-12 23:25:46
加大回收片段的浓度，或者换个载体，我有个4000多的刚开始用PMD-19连不上，后来把回收片段浓度加大了，换了promaga的T载体，就连上了
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12楼2010-10-12 21:35:17
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我本兽医

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):taq酶？ 2010-10-12 23:26:08
用TAQ酶，保证回收浓度，1:4：5连接，感受态效率不太低==OK
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13楼2010-10-12 22:29:10
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xinmucong123 at 2010-10-12 21:35:17:
加大回收片段的浓度，或者换个载体，我有个4000多的刚开始用PMD-19连不上，后来把回收片段浓度加大了，换了promaga的T载体，就连上了

说的应该是Thermus Aquaticus DNA Ligase，就是Taq DNA连接酶。不过据我所知，Taq DNA 连接酶连接双联DNA中的单链切刻比较有效。我还是认为T4效果比较好，而且平末端和粘性末端都能连。
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14楼2010-10-15 13:57:52
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xmasylm

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提高浓度，加polyA
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15楼2010-10-16 00:22:55
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