应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【专题】引入酶切位点的引物设计问题
122/2返回列表上一页12
查看: 2329  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
yujiaping1(金币+1): 2010-09-14 11:26:22
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-09-14 10:41:22:

我原来的想法是Ta克隆后酶切 这样还可以方便的测序以验证序列，所以没加保护碱基，配平GC含量真的这么重要么？

也不需要那么严格吧，我有时候引物Tm七八十度，用六十多度一样可以扩增得很好啊。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
11楼2010-09-14 10:47:04
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihengyang86

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by yujiaping1 at 2010-09-13 21:44:28:
为了跑原核表达设计5‘端加酶切位点的引物
原始引物根据pcr引物设计基本原则设计好了
在加酶切位点的时候烦心了
因为引物要加Not I酶切位点结果引入了8个GC
造成总引物GC含量超过72%，为了配平GC含量于是引进 ...

您好！我最近设计引入酶切位点的引物，也遇到您说的情况，引入酶切位点和保护性碱基后 总引物GC含量很高（75%以上），Tm值更是达到了80度以上。
您提到像这种情况可不用考虑5‘端的修饰来计算引物的Tm值，这个在PCR的实际操作中可行吗？
另外，你后面考虑的问题，最终你在PCR的过程中是如何解决或优化的呢？
谢谢！期待您的指点！！！
赞一下 回复此楼
12楼2012-02-29 16:35:18
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yujiaping1 的主题更新
122/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭