24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2609  |  回复: 11

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

yujiaping1(金币+1): 2010-09-14 11:26:22
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-09-14 10:41:22:

我原来的想法是Ta克隆后酶切 这样还可以方便的测序以验证序列,所以没加保护碱基,配平GC含量真的这么重要么?

也不需要那么严格吧,我有时候引物Tm七八十度,用六十多度一样可以扩增得很好啊。
Thank-you,so-blue.
11楼2010-09-14 10:47:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihengyang86

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by yujiaping1 at 2010-09-13 21:44:28:
为了跑原核表达设计5‘端加酶切位点的引物
原始引物根据pcr引物设计基本原则设计好了
在加酶切位点的时候烦心了
因为引物要加Not I酶切位点结果引入了8个GC
造成总引物GC含量超过72%,为了配平GC含量于是引进 ...

您好!我最近设计引入酶切位点的引物,也遇到您说的情况,引入酶切位点和保护性碱基后 总引物GC含量很高(75%以上),Tm值更是达到了80度以上。
您提到像这种情况可不用考虑5‘端的修饰来计算引物的Tm值,这个在PCR的实际操作中可行吗?
另外,你后面考虑的问题,最终你在PCR的过程中是如何解决或优化的呢?
谢谢!期待您的指点!!!
12楼2012-02-29 16:35:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yujiaping1 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 282,求调剂 +12 jggshjkkm 2026-04-09 14/700 2026-04-11 09:39 by 猪会飞
[考研] 277 数一104,学硕,求调剂 +19 瓶子PZ 2026-04-09 21/1050 2026-04-11 09:39 by 逆水乘风
[考研] 本科西工大 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:00 by 来看流星雨10
[考研] 287求调剂 +15 Fnhc 2026-04-07 21/1050 2026-04-10 19:09 by chemisry
[考研] 0856专硕求调剂 希望是a区院校 +21 好好休息好不好 2026-04-09 24/1200 2026-04-10 16:58 by luoyongfeng
[考研] 一志愿华中农微生物,288分,三年实验经历 +10 代fish 2026-04-09 10/500 2026-04-10 09:49 by potato妹
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +11 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-04 11/550 2026-04-10 09:37 by 690616278
[考研] 生物与医药273求调剂 +18 荔题南墙 2026-04-05 19/950 2026-04-10 08:14 by kangsm
[考研] 材料与化工371求调剂 +17 陪琳看海 2026-04-04 18/900 2026-04-10 07:51 by 314126402
[考研] 一志愿085502,267分求调剂 +10 再忙也要吃饭啊 2026-04-08 11/550 2026-04-09 19:51 by gong120082
[考研] 0703化学求调剂 +21 不知名的小卅 2026-04-08 21/1050 2026-04-09 18:55 by l_paradox
[考研] 085600材料与化工,求调剂 +11 won_qii 2026-04-07 11/550 2026-04-09 17:03 by luoyongfeng
[考研] 311求调剂 +6 surte 2026-04-08 13/650 2026-04-09 14:00 by surte
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +3 慕绝cc 2026-04-09 3/150 2026-04-09 09:57 by liuhuiying09
[考研] 生物学学硕,初试351分,求调剂 +4 …~、王…~ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
[考研] 270求调剂 +3 031127 2026-04-06 4/200 2026-04-08 21:00 by 逆水乘风
[考研] 一志愿华东理工085601材料工程303分求调剂 +15 a1708 2026-04-06 15/750 2026-04-08 16:23 by luoyongfeng
[考研] 315求调剂 +17 欣喜777 2026-04-04 18/900 2026-04-08 13:54 by hangsimei
[考研] (调剂)一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生 +7 狠狠加油 2026-04-05 8/400 2026-04-06 16:52 by momo皓
信息提示
请填处理意见