| 查看: 503 | 回复: 1 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
gaoshandian1金虫 (小有名气)
|
[交流]
原位杂交组织化学常用试剂及处理1
|
||
|
一、杂交前准备 （一）DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待处理水（蒸馏水等）中，经猛烈振摇后，于室温静止数小时，然后高压灭菌，以除去降解DEPC（DEPC分解为CO2和乙醇）。有些试剂可直接加入DEPC，终浓度一般为0.1%～0.4%，原则上在杂交及其以前的步骤中，所有液体试剂均需用DEPC处理，或用DEPC水配制，包括乙醇的稀释。此外，接触标本以及标本有关的空中的洗涤也需DEPC水洗涤。 注意：①DEPC是一种潜在的致癌物质，在操作中应尽量在通风的条件下进行，并避免接触皮肤。②含有Tris缓冲液的溶液中，不能加入DEPC。 （二）载玻片的处理 组织原位杂交，常在载玻片上进行，故载玻片的洗涤至关重要，必须保持清洁，并且不能有任何核酸的污染。处理方法如下： （1）先经洗衣粉浸泡过夜，次日自来水冲洗后，泡酸数小时以上，取出后再用流水冲洗，双蒸水冲洗2～3次，置160℃以上烤箱中烧烤4h以上，或经15磅高压灭菌20min。经以上处理可清除载片上的核酸酶。 （2）HCl处理法 |
回复此楼» 猜你喜欢
中药学
已经有0人回复
-
案例汇报书写case report
已经有6人回复
-
口腔颅颌面科学论文润色/翻译怎么收费?
已经有176人回复
-
求助药理方向工作量少能投什么双核？
已经有1人回复
-
绿原酸对照溶液配制1个月，配完之后一直放冰箱，现在峰面积低了30，会降解这么快吗
已经有3人回复
-
5/6肾切除造慢性肾脏疾病，部分切除的残肾与脂肪粘连，这个正常吗？
已经有0人回复
-
视神经挤压损伤模型ONC小鼠实验相关
已经有2人回复
-
如果明天放榜，一般国合几点能查到？
已经有17人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1
 |
2楼2006-05-04 10:04:02