| 查看: 169 | 回复: 1 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
gaoshandian1金虫 (小有名气)
|
[交流]
免疫荧光细胞化学的原理2
|
||
|
3．检查抗原法双薄片 此法是直接法的重要改进，先用特异性（对细胞或组织内抗原）抗体（或称第一抗体）与细胞标本反应，随后用缓冲盐水洗去未与抗原结合的抗体，再用间接荧光抗体（也称第二抗体，种特异性）与结合在抗原上的抗体（是第二抗体的抗原）结合，形成抗原-抗体-荧光抗体的复合物。由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗全显著多于直接法，从而提高了敏感性。如细胞抗原上每个分子结合3～5个分子抗体，当此抗体作为抗原时又可结合3～5分子的荧光抗体，所以和直接法相比荧光亮度可增强3至4倍。此法除灵敏性高外，它只需要制备一种种属间接荧光抗体，可以适用于多种第一抗体的标记显示。这是现在最广泛应用的技术。 三、补体法 1．直接检查组织内免疫复合物法 用抗补体C3等荧光抗体直接作用组织切片，与其中结合在抗原抗体复合物上的补体反应，而形成抗原抗体补体复合物---抗补体荧光抗体复合物，在荧光显微镜下呈现阳性荧光的部位就是免疫复合物的存在处，此法常用于肾穿刺组织活检诊断等。 2．间接检查组织内抗原法 常将新鲜补体与第一抗体混合同时加在抗原标本切片上，经37℃孵育后，如发生抗原补体抗体反应，补体就结合在此复合物上，再用抗补体荧光抗体与结合的补体反应，形成抗原抗体—抗补体荧光抗体的复合物，此法优点是只需一种荧光抗体可适用于各种不同种属来源的第一抗体的标记显示。 四、双重免疫荧光标记法 在同一细胞组织标本上需要同时检查两种抗原时，要进行双重荧光染色，一般均采用直接法，将两种荧光抗体（如抗A和抗B）以适当比例混合，加在标本上孵育后， 按直接法洗去未结合的荧光抗体，抗A抗体用异硫氰酸荧光素标记，发黄绿色荧光；抗B抗体用TMRITC或RB200标记，发红色荧光，可以明确显示两种抗原的定位。 五、对照试验 为了保证免疫荧光细胞化学染色的准确性，排除某些非特异性染色，必须在初次试验时进行以上对照试验： 1．直接法 需设下述对照试验 （1）标本自发荧光对照：标本只加PBS或不加PBS，缓冲甘油封片，荧光显微镜观察应呈阴性荧光（无与特异性荧光相似的荧光）。 （2）抑制试验：可分为二步法和一步法。 ①二步抑制法：标本先加未标记的特异性抗体，再加标记荧光抗体，结果应呈阴性或明显减弱的荧光。 ②一步抑制法：先将荧光抗体用未标记抗体作适量混合，再加在标本上染色，结果应为阴性。此法效果较二步法好，并且简便。 （3）阳性对照：用已知阳性标本作直接法免疫荧光染色，结果应呈阳性荧光 。 如对照（1）和（2）无荧光或弱荧光，（3）和待检查标本呈强荧光即为特异性阳性荧光。 2．间接法 （1）自发荧光对照：同上（一）。 （2）荧光抗体对照：标本只加间接荧光抗体染色，结果阴性。 （3）抑制试验：同上。 （4）阳性对照：同上。 如对照（1）、（2）、（3）均呈阴性，阳性对照和待检标本阳性则为特异性荧光。 3．补体法 （1）自发荧光对照 （2）荧光抗体对照 （3）抑制试验 （4）补体对照：取新鲜豚鼠血清1：10稀释先作用标本，再用抗补体荧光抗体染色，结果阴性。 （5）抑制试验：标本加灭活的第一抗体，再用1：10稀释度的新鲜豚鼠血清孵育后，再加未标记的抗补体血清与抗补体荧光抗体等量混合稀 释液，结果应为阴性。 （6）阳性对照：（1）～（5）结果阴性，（6）和待检标本阳性时，则为特异性荧光 |
回复此楼» 猜你喜欢
初来乍到：请问怎么找版主删帖呀？
已经有12人回复
-
医学317求调剂
已经有0人回复
-
运动系统论文润色/翻译怎么收费?
已经有58人回复
-
国自然系统又提醒了，看来明天放榜
已经有51人回复
-
R语言问题，森林图中，这个横坐标怎么实现？
已经有0人回复
-
期刊以西班牙语印刷，一定要用西班牙语写稿投稿吗？
已经有0人回复
-
skin research and technology支付APC后1个月了，还在制作中
已经有5人回复
-
一志愿天津医科大学求调剂
已经有0人回复
-
求调剂
已经有0人回复
-
西交交通大学-智能化诊疗装备研究中心-招博士研究生
已经有12人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1
 |
2楼2006-05-04 10:05:26
