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mqw1983银虫 (小有名气)
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【求助】正葡萄糖钳夹技术 操作步骤
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| 正葡萄糖钳夹技术 操作步骤请问谁有详细点的？最好是做动物的。急用，非常感谢！ |
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dc1055
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mqw1983(金币+10): 2010-09-17 17:33:03
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3个月前，我刚好做过正糖钳实验。我的具体步骤无私的奉献给你，有什么问题可以问。 【实验仪器、试剂及器械】 WZ-50C2单道微量注射泵，OneTouchRUltra血糖仪、试纸，胰岛素注射液，肝素钠注射液，葡萄糖注射液。 手术器械：小动脉夹、静脉输液针、显微外科剪、显微外科镊、插管、一次性使用无菌注射器、40W手术灯、大鼠固定板、止血钳等。 【实验方法】 手术方法： 大鼠腹腔注射戊巴比妥钠（25mg/kg）麻醉，仰位固定，切开颈部正中皮肤。分离右侧颈外静脉，结扎远心端，用眼科剪作切口，向近心端插入连接三通旋塞的插管（插管中预先注入80ul/ml肝素生理盐水溶液）。用眼科镊夹住静脉壁和插管，向前行进0.5cm，结扎固定插管。分离左侧颈总动脉，结扎远心端，用小动脉夹夹住近心端，用眼科剪作切口，往近心端反向插入连接1ml针筒的插管（插管中预先注入50u/ml肝素生理盐水溶液）。放开小动脉夹，用眼科镊夹住动脉壁和插管，向前行进0.5cm，结扎固定插管。颈静脉注射50ul/ml肝素0.1ml/100g作预防抗凝。三通旋塞的一个进口连接胰岛素输注微量泵另一个进口连接20%葡萄糖输注微量泵，避免管腔中出现气泡。待插管手术和输注装置安装完毕后，开始实验。 实验方法： ⑴用1ml针筒从右颈动脉取血0.5ml，用手术钳夹住插管，用OneTouchR Ultra血糖仪和试纸测定基础血糖约需5ul，放开手术钳，将剩余血再注回颈总动脉，插管头上加50ul肝素生理盐水溶液。 ⑵胰岛素以速率为0.6ml/h（10µl/min）恒速输注，胰岛素输注10min后，以⑴同样方法取右颈动脉血测血糖值，如血糖低于基础值，则开始输注20%葡萄糖，每隔10min取血，测定血糖。根据血糖值不断调整葡萄糖输注速率，使血糖维持在5mmol/L上下，一般30~60min可达稳态。达稳态后，每5min取血测血糖，记录稳态下6-8次葡萄糖输注速率的平均值作为GIR（glucose infusion rate）取稳态下6次血糖的平均值作为稳态下的血糖（BG）。当大鼠产生胰岛素抵抗时，血糖持续升高，要求葡萄糖的流量更低，将20%葡萄糖溶液改为10%葡萄糖溶液。若血糖继续升高，则再更换为5%葡萄糖溶液。观察大鼠稳态下的血糖（BG）和葡萄糖输注速率（GIR）。 【观察指标】 大鼠正糖钳试验稳态下的血糖（BG）和葡萄糖输注速率（GIR）。 【注意事项】 1.手术过程中，操作应轻尽量避免不必要的损伤，颈部切口也不宜太大，以防体液损失过多。 2.分离皮肤与其周围组织时，要细心，尽量避免出血。 3.正糖钳实验在短时间内连续多次测定血糖，故要求快速测血糖的方法，可采用血糖仪及其配套试纸来完成测定。 4.葡萄糖输入体内直接引起血糖变化，而输入胰岛素需经体内反应后再引起血糖变化，故血糖对葡萄糖输注速率较对胰岛素输注速率更敏感，当血糖被“钳”住（即血糖处于稳态）时，葡萄糖输注速率随胰岛素输注速率提高而提高。 5.实验过程中要尽量保持安静，以防实验动物应激而影响实验数据。 |
2楼2010-09-15 20:30:44