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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】纯化的蛋白容易降解,高手请给与指点 已有1人参与

最近纯化一个带MBP标签的融合蛋白,过完MBP的柱子以后,目的条带下面有很多其他的小带,问高手是不是降解的原因?如果是降解,那么有什么解决的办法?另外我纯化过程中加入了PMSF。
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天道酬勤
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做WESTERN看看小带是不是你的目的蛋白

另外把你的蛋白分出三份,一份液氮速冻后放在-80℃,一份放在4℃,一份放在18℃,一周后将这三个样品电泳,对比条带有没有差异。如果后两者比前者多出条带了,有可能是降解。

如果确定降解,建议根据二级结构和文献报道资料设计截断体尝试。
2楼2010-09-02 12:13:27
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