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实验室常用溶液配制(希望对大家有帮助)
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一. 常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2•6H2O于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。 20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套） 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。 10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。 100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制） 2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。 100×Denhardt试剂（Denhardt’s regent） 成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量 2%聚蔗糖（Ficoll，400型） 2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（组分V） 水 2g 2g 2g 加水至总体积为100ml ,依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。 10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 贮液 ,100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L 贮液,100mmol/L DTT:1ml 1mol/L 贮液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 贮液,5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）:50ul 1 mmol/L 贮液,0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）:0.5ml 10 mg/mL 贮液 ,水: 2.25ml 将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。 100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） 可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。 10mmol/L dNTP混合液 成分及终浓度 配制20ul溶液各成分的用量 10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液 2ul 100 mmol/L dCTP 贮液 2ul 100 mmol/L dGTP 贮液 2ul 100 mmol/L dTTP 贮液 12ul 20％PEG 8000/2.5M NaCl 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量 质量浓度为20％聚乙二醇 2.5mol/L 氯化钠 水 20g 50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠 补足100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。 20×SSC 成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 300mmol/L 柠檬酸三钠（二水） 3mol/L 氯化钠 水 88.2g 175.3g 补足1L 溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。 DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。 甲酰胺（deionized formamide） 直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。 磷酸缓冲液（phosphate buffer） 按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4•H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。 1mol/L 磷酸二氢钠（ml） 1mol/L 磷酸氢二钠（ml） 最终pH值 877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 TE（用于悬浮和贮存DNA） 成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/L Tris－HCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml Tris缓冲液（Tris-HCl buffer） 将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。 浓盐酸的体积（ml） pH 8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液 50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液 成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 染料 1％溴酚蓝（bromophenol blue） 加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF） 溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide） 小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。 凝胶上样液（gel loading solutions） 6×碱性凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.3 N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA 18％聚蔗糖（400型） 0.15％溴甲酚绿 0.25％二甲苯青FF 水 300ul 10N 氢氧化钠 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 补足到10ml 6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15％聚蔗糖（400型） 水 1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.5g 补足到10ml 6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.25％溴酚蓝 0.25％二甲苯青FF 15％聚蔗糖（400型） 水 2.5ml 1％溴酚蓝 2.5ml 1％二甲苯青FF 1.5g 补足到10ml 6×甘油凝胶上样液（4℃贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50％甘油 水 1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml 6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40％聚蔗糖 水 1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g 补足到10ml 10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.2％溴酚蓝 0.2％二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1％SDS 50％甘油 水 20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10％ SDS 5ml 补足到10ml 三.常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化钠 0.5g 1 mol/L 氯化钾 2.5ml 用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。 SOC培养基 成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。 TB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。 2×YT培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 16g 酵母提取物 10g 氯化钠 4ml 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 YPD培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g 用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。 四.常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 几种溶液的配制方法 1、PBS: 取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。 2、TBS： 2.1 Tris缓冲液配方：（0.5 M pH7.6） Tris（三羟甲基氨基甲烷） 60.57g 1N HCL 约420ml 双蒸水 加至1000ml Tris缓冲液配制方法： 先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）将pH调至7.6， 最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液，4℃冰箱中保存。 2.2 TBS配方： Tris-HCI缓冲液（0.5M pH7.6） 100ml NaCI 8.5~9g (0.15mol/L) 双蒸水 加至1000ml TBS配制方法： 先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。 3、枸橼酸盐缓冲液（Citrate buffer）： 3.1 储存液： A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g枸橼酸（C6H8O7•H20）溶于1000ml蒸馏水中。 B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠（C6H5Na3O7•2H20）溶于1000ml蒸馏水中。 3.2 工作液： 0.1 取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为6.0 4、胰酶（Trypsin）： 4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液： 常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合（1:3稀释），则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%（1:10稀释）至0.25%（1:1稀释）。 4.2 ZLI-9010胰蛋白酶： 取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。 5、胃酶（Pepsin）： 4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。 （我公司备有ZLI-9013胃蛋白酶消化工作液，不需稀释直接滴加使用，欢迎选购） 6、DAB： 6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit： 使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1ml DAB工作液，简单易用。 6.1 ZLI-9030 DAB： 6mgDAB溶于10mlTBS（0.05M pH7.6），再加入0.1ml浓度为3％的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。 7、AEC： 4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液（pH5.2），然后加入0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。 8、RIPA： 1×PBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS（此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。 8.1 10mg/ml l/ml）PMSF异丙醇溶液（用量为10 l/ml）8.2 Aprotinin（Sigma产品，用量为30 8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液 l/ml）（用量为10 9、Blotto A： 常规使用1×PBS，5% milk，0.05% Tween 20。 10、Blotto B： 与Phosphotyrosine抗体共用，1×PBS，1% milk，0.05% Tween 20。部分实验中milk可完全去除，但可能引起背景增高。 [ Last edited by BlueGuy on 2006-4-26 at 20:42 ] |
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四、常用抗生素溶液 抗生素 贮存液a 工作浓度 浓度 保存条件 严紧型质粒 松弛型质粒 氨苄青霉素 50mg/ml(溶于水) -20℃ 20μg/ml 60μg/ml 羧苄青霉素 50mg/ml(溶于水) -20℃ 20μg/ml 60μg/ml 氯霉素 34mg/ml(溶于乙醇) -20℃ 25μg/ml 170μg/ml 卡那霉素 10mg/ml(溶于水) -20℃ 10μg/ml 50μg/ml 链霉素 10mg/ml(溶于水) -20℃ 10μg/ml 50μg/ml 四环素b 5mg/ml(溶于乙醇) -20℃ 10μg/ml 50μg/ml a：以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22μm滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。 b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。 五、常用贮存液的配制 1．30%丙烯酰胺溶液 【配制方法】 将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。 【注意】 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。 一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1 Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。 在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。 2．40%丙烯酰胺 【配制方法】 把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。 【注意】 见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。 3．放线菌素D溶液 【配制方法】 把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。 【注意】 放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。 药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。 4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液 【配制方法】 在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃ 5．10mol/L乙酸酰溶液 【配制方法】 把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。 6．10%过硫酸铵溶液 【配制方法】 把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。 7．BCIP溶液 【配制方法】 把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃ 8．2×BES缓冲盐溶液 【配制方法】 用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节 该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。 9．1mol/L CaCl2溶液 【配制方法】 在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2•6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。 【注意】 制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。 10．2.5mol/L CaCl2溶液 【配制方法】 在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2•6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。 11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液 【配制方法】 用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。 【注意】 DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。 12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液 【配制方法】 把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/L Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。 碱基 波长（nm） 消化系数（ε）[L/（mol•cm）] A 259 1.54×104 G 253 1.37×104 C 271 9.10×103 T 260 7.40×103 比色杯光径为1cm时,吸光度=εM 13．0.5mol/L EDTA(pH8.0)溶液 【配制方法】 在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na•2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节 溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。 【注意】 EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。 14．溴化乙锭（10mg/ml溶液） 【配制方法】 在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。 【注意】 小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。 15．2×HEPES缓冲盐溶液 【配制方法】 用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4•2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/L NaOH调节 pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。 16．IPTG溶液 【配制方法】 IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。 17．1mol/L乙酸镁溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。 18．1mol/L MgCl2溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解203.4g MgCl2•6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。 【注意】 MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。 19．β-巯基乙醇（BME）溶液 【配制方法】 一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。 【注意】 BME或含有BME的溶液不能高压处理。 20．NBT溶液 【配制方法】 把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。 21．酚/氯仿溶液 【配制方法】 把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris•HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/L Tris•HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。 【注意】 酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液 【配制方法】 用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。 【注意】 PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。 PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/L PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节 为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液 【配制方法】 在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节 溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。 24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液 【配制方法】 将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节 pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。 25．乙酸钾溶液（用于碱裂解） 【配制方法】 在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。 26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液 【配制方法】 在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pH值至5.2或用稀乙酸调节 pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。 27．5mol/L NaCl溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。 28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液 【配制方法】 在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节 溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。 【注意】 SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10% SDS溶液无须灭菌。 29．20×SSC溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/L NaOH溶液调节 pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。 30．20×SSPE溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4•H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节 pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。 31．100%三氯乙酸溶液 【配制方法】 在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。 32．1mol/L Tris溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节 pH值至所需值。 pH HCl 7.4 70ml 7.6 60ml 8.0 42ml 应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。 【注意】 如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。 尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。 Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。 33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/L Tris） 【配制方法】 在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。 34．X-gal溶液 【配制方法】 X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。 杂交试验中用于降低背景的封闭剂 试剂 用途 Denhardt试剂 Northern杂交 使用RNA探针的杂交 单拷贝序列的Southern杂交 将DNA固定于尼龙膜上的杂交 Denhardt试剂通常配制50×贮存液，过滤后保存于-20℃。可将该贮存液10倍稀释于预杂交液（常为含有0.5%SDS和100μg/ml经变性被打断的鲑精DNA的6×SSC或6×SSPE）中。50×Denhardt液中含5g聚蔗糖（Ficoll,400型，Pharmacia）、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白（组分V”Sigmal），加水至终体积为500ml。 BLOTTO Grunstein-Hogness杂交 Benton-Davis杂交 除单拷贝序列Southern杂交以外的所有Southern杂交 斑点印迹 1×BLOTT（牛乳转移技术优化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer）,是含5%胶脂奶粉和0.02%叠氮钠的水溶液，应保存于4℃。使用前可用预杂交液稀释25倍。BLOTTO不应与高浓度的SDS并用，因为后者会导致牛奶中蛋白质析出。如果杂交背景不合要求，可在杂交液中加入NP-40至终浓度为1%。BLOTTO不能用作Northern杂交的封闭剂，因为这一封闭剂中可能含有RNA酶，其活性之高使人无法接受。 注意：叠氮钠有毒性，取用时需戴手套小心操作。含叠氮钠的溶液应予明确标记。 肝素 Southern杂交 原位杂交 肝素（Sigma H-7005，从猪中提取的二级产品或相当等级的产品）用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/ml的浓度，保存于4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液中用作封闭剂的浓度为500μg/ml，在不含葡聚糖硫酸酯的杂交液中的浓度为50μg/ml。 经变性并被打断的鲑精DNA southern和Northern杂交 把鲑鱼精子DNA（Sigma,Ⅲ,盐钠）溶解于水配制成10mg/ml的浓度，必要时于室温磁力搅拌2～4h助溶。把溶液中NaCl的浓度调至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合DNA溶液快速通17号皮下注射针头12次，以剪切DNA。加入2倍体积用冰预冷的乙醇沉淀DNA。离心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/ml的浓度，测定溶液的OD260值并计算出精确的DNA浓度，然后煮沸10min，分装成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加热5min，然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100μg/ml经变性并被打断的鲑鱼精子DNA |
3楼2006-04-26 17:53:02
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?????????????????????? ???????????????????? ?????? ?????? ??max(pH7.0) 1????????pH7.0???Ц?max??????????? OD280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15 CTP 483 271 9000 0.97 GTP 523 253 13700 0.66 UTP 484 262 10000 0.38 dATP 494 259 15200 0.15 dCTP 467 271 9300 0.98 dGTP 507 253 13700 0.66 dTTP 482 267 9600 0.71 2?????ú?????????????? ???? ???????? ?????? ??DNA 48502?????????? 3.0??107 pBR322 4363??????? 2.8??106 28SrRNA 4800 1.6??106 23SrRNA 3700 1.2??106 18SrRNA 1900 6.1??105 19SrRNA 1700 5.5??105 5SrRNA 120 3.6??104 tRNA???????? 75 2.5??104 3?????ú???????????? ??1?????????? 1??g=10-6g?????????? 1pg=10-12g 1ng=10-9g ??????????1fg=10-15g ??2?????????? 1A260???DNA=50??g/ml 1A260????DNA=30??g/ml 1A260????RNA=40??g/ml ??3??DNA??????? 1??g 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol??? 1??g pBR322 DNA=0.36pmol 1pmol 1000bp DNA=0.66??g 1pmol pBR322=2.8??g 1kb???DNA?????Σ?=6.6??105?????? 1kb????DNA?????Σ?=3.3??105?????? 1kb????RNA?????Σ?=3.4??105?????? ??4????????????? 100pmol??????100??000??????=10??g 100pmol??????50??000??????=5??g 100pmol??????10??000??????=1??g ????????????????=126.7?????? ??5????????/DNA???? 1kb DNA=333 ???????????????=3.7??104MW?????? 10??000MW??????=270bp DNA 30??000MW??????=810bp DNA 50??000MW??????=1.35kb 100??000MW??????=2.7kb DNA 4????????????????????????? ??1???????????????? ??2???з???????????? ??3???????????????? ????? ?????? ?????B 97??400 ?????? 31??00 ????? 212??000 ???????? 66??200 ????????? 21??500 ??-????????B 116??000 ????????? 55??000 ????? ?? ?????B 97??400 ?????? 42??700 ???????? 16??900 ???????? 66??200 ???? 40??000 ???? 14??400 ?????????` 57??000 ?????? 31??000 ??????F1?? 8??100 ???? 40??000 ????????? 21??500 ??????F2?? 6??200 ?? ?? ????? ?? ??????F3?? 2??500 ?? ?? ???? 14??400 ?? ?? 5??????DNA??????????????? ??DNA/Hind?? ??DNA/EcoR?? ??/Hind??+EcoR?? pBR322/Hae?? 23130 21226 21227 587 123 9416 7421 5148 405 104 6557 5804 4973 504 89 4361 5643 4268 458 80 2322 4843 3530 434 64 2027 3530 2027 267 57 564 ?? 1904 234 51 125 ?? 1584 213 21 ?? ?? 1375 192 18 ?? ?? 974 184 11 ?? ?? 831 124 7 ?? ?? 564 ?? ?? ?? ?? 125 ?? ?? ????? pBR322/Hinf?? ???174/Hinf?? ???174/Hae ?? ???174/Tap?? 1631 726 140 1353 2914 517 713 118 1078 1175 506 553 100 872 404 396 500 82 603 327 344 417 66 310 231 298 413 48 281 141 221 311 42 271 87 220 249 40 234 54 154 200 24 194 33 75 151 ?? 118 20 ?? ?? ?? 72 ?? ???????????? 1???????????????? 2????????? ??1??25????0.1mol/L???????????????? pH 1mol/L K2HPO4(ml) 1mol/L KH2PO4(ml) 5.8 8.5 91.5 6.0 13.2 86.8 6.2 19.2 80.8 6.4 27.8 72.2 6.6 38.1 61.9 6.8 49.7 50.3 7.0 61.5 38.5 7.2 71.7 28.3 7.4 80.2 19.8 7.6 86.6 13.4 7.8 90.8 9.2 8.0 94.0 6.2 ??2??25????0.1mol/L????????????????? pH 1mol/L Na2HPO4(ml) 1mol/L NaH2PO4(ml) 5.8 7.9 92.1 6.0 12.0 88.0 6.2 17.8 82.2 6.4 25.5 74.5 6.6 35.2 64.8 6.8 46.3 53.7 7.0 57.7 42.3 7.2 68.4 31.6 7.4 77.4 22.6 7.6 84.5 15.5 7.8 89.6 10.4 8.0 93.2 6.8 ??:?????????????????1mol/L??????????1000ml??????Henderson-Hasselbalch?????????pH??? pH=pK??+1g([????????]/[???????]) ????pK??=6.86(25??)?? 3?????????? ????????????????? 98%?????????? 10mol/L EDTA(pH8.0) 0.025%???????FF 0.025%????? ???????????????????????????????????????????????????д????????????????????????????????????????????????Dowex XG8??????????????1С???????????????????Whatman 1?????????2?Σ????????????????С?????????-70?档 ???????????? ????? ???? ????????????? Tris-????TAE?? 1????0.04mol/L Tris-???? 50????242g Tris?? ?? 0.001mol/L EDTA 57.1ml?????? ?? ?? 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-????TPE?? 1??:0.09mol/L Tris-???? 10??:10g Tris?? ?? 0.002mol/L EDTA 15.5ml85%????1.679g/ml?? ?? ?? 40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-????TBE??a 0.5??0.045mol/L Tris-???? 5????54g Tris?? ?? 0.001mol/L EDTA 27.5???? ?? ?? 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) ????????b 1??:50mmol/L NaOH 1??:5ml 10mol/L NaOH ?? 1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) Tris-?????c 1??:25mmol/L Tris 5??:15.1g Tris ?? 250mmol/L ????? 94g ??????????????pH8.3?? ?? 0.1% SDS 50ml 10% SDS(?????) ????? ??TBE?????????????γ?????????????????????????????ò????????5??????????????????????????? ???????1??TBE???????????1??5?????????????????????????????0.5??????????????????????????????????е??????????????1??10?????????????????? ???о????????????????????????С?? ?????????????????????????????1??TBE????????????????? ????????????????????? ??Tris-??????????SDS????????????????? 2??SDS??????????????? 100mmol/L Tris•HCl(6.8) 200mmol/L???????????DTT?? 4%SDS????????? 0.2%????? 20%???? ????DTT??2??SDS??????????????????????????????????1mol/L????????????????????С? 4??????????????? ????????? 6??????? ??????? ?? 0.25%????? 4?? 0.25%???????FF 40%??W/V?????????? ?? 0.25????? ???? 0.25%???????FF 15%??????(Ficoll400) ?? 0.25%????? 4?? 0.25%???????FF 30%???????? ?? 0.25%????? 4?? 40%(W/V)???????? ?? ????????????: ?? 300mmol/L NaOH 6mmol/L EDTA ?? 18%??????(Ficoll400) 4?? 0.15%?????? 0.25%???????FF ???????????????????????????????????????????????DNA?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????FF??2.2??????????????????????0.5??TBF??????????????????????е???????????300bp????????DNA??????????????FF?????????4kb????????DNA????????????????0.5%??1.4%???Χ?????Щ???????????????仯????????????? ?????????????????????????????????????????????????????????????????????pH?????????????????????????? 5??????pH???Tris??????????? ????pH???Tris???????????? ????pH???25?棩 0.1mol/L HCl????? 7??1 45??7 7??2 44??7 7??3 43??4 7??4 42??0 7??5 40??3 7??6 38??5 7??7 36??6 7??8 34??5 7??9 32??0 8??0 29??2 8.1 26.2 8.2 22.9 8.3 19.9 8.4 17.2 8.5 14.7 8.6 12.4 8.7 10.3 8.8 8.5 8.9 7.0 ?????pH???0.05mol/L Tris??????????????50ml 0.1mol/L Tris???????????????????????λ??ml????0.1ml/L HCl????????????????100ml ??2??????50mmol/L Tris•HCl?pH?????? 4?? 25?? 37?? 8??1 7??5 7??2 8??2 7??6 7??3 8??3 7??7 7??4 8??4 7??8 7??5 8??5 7??9 7??6 8??6 8??0 7??7 8??7 8??1 7??8 8??8 8??2 7??9 8??9 8??3 8??0 9??0 8??4 8??1 9??1 8??5 8??2 9??2 8??6 8??3 9??3 8??7 8??4 9??4 8??8 8??5 ??6????????????pKa? ????? ?????? pKa? ???巶Χ Trisa 12.1 8.08 7.1??7.9 HEPESb 283.3 7.47 7.2??8.2 MPOSc 209.3 7.15 6.6??7.8 PIPESd 304.3 6.76 6.2??7.3 MESe 195.2 6.09 5.4??6.8 a???????????????飻b??N-2-????????-N??-2-??????c??3-??N-??????????????d??N??N??-???2-?????????e??2-??N-????????????? 7?????????????pH????? ??????? pKa(20??) ??pKa/10?? Mes 6.15 -0.110 Ada 6.60 -0.110 PiPes 6.80 -0.085 Aces 6.90 -0.200 Bes 7.15 -0.160 Mops 7.20 -0.013 Tes 7.50 -0.200 Hepes 7.55 -0.014 Tricine 8.15 -0.210 Tris 8.30 -0.310 Bicine 8.35 -0.180 Glycylglycine 8.40 -0.280 ??????????????? 1?????? ????????50mg/ml????????????????С?????????-20?档??С???????ú???趪???? 2???????????? ?? ????? ??????? ?????? ???????? ??? ????? ?? 0.01mol/L Tris(pH7.8) ?? ??ù?????a 20mg/ml -20?棨??????? 1mg/ml 0.01mol/L EDTA 37?? ??????b ?? 0.5% SDS ?? ?? 0.01mol/L Tris(pH7.8) ?? ?????Kc 20mg/ml -20?棨??????? 50??g/ml 0.005mol/L EDTA 37??56?? ????????? ?? 0.5% SDS ?? a????ù???????????????Streptomyces griseus???з?????????????????????????????? b??????????????DNA???RNA?????????????????????????????????????????????????????10mmol./L Tris•HCl(pH7.5)??10mmol/L NaCl?У????20mg/ml??????37??????1h????????????ù??????????С????????????У?????-20?档 c???????K????????????????????????????????????????Tritirachium album Limber???д?????????????????Ca2+???λ???????????????????????????????????????????????????????????г??Ca2+???????????????仯????????????80%???????????????????????????????????????????????????????????????K?????????????????EDTA??????????????Mg2+??????????????????????????????????K???н??????????????????????????????ú???1mmol/L Ca2+??????EDTA???????????????????????????????EGT??pH8.0??????????2mmol/L,??????Ca2+?? 3????DNA???RNA? ????RNA???RNA?A??????10mmol/L Tris•HCl(pH7.5)??15mmol/L NaCl?У????10mg/ml????????100?????15min?????????????????????С???????-20?档 ??????????????? |
2楼2006-04-26 17:52:18
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六、常用凝胶的技术参数 1．葡聚糖凝胶的某些技术数据 种类 干颗粒直径（μ） 分子量分级范围 床体积毫升/克干分子筛 得水值 溶胀最少平衡时间（h） 柱头压力（kPa）(2.5cm直径柱) 肽及球形蛋白质 葡聚糖（线性分子） 室温 沸水浴 Sephadex G-10 40～ 120 ～700 ～700 2～ 3 1.0±0.1 3 1 Sephadex G-10 40～ 120 ～1500 1500 2.5～3.5 1.5±3.5 3 1 Sephadex G-25 粗级 100～300 (≈5～100目) 中级 50～150 (≈100～200目) 1,000～ 5,000 100～ 5,000 4～6 1.5±0.2 6 2 细级 20～800(≈200～400目) 超细 10～40 Sephadex G-50 粗级 100～200 中级 50～150 1,500～ 500～ 细级 20～80 30,000 10,000 9～11 5.0±0.3 6 2 超细 10～40 Sephadex G-75 40～120 3,000～ 1,000～ 超细 10～40 70,000 950,000 12～15 7.5±0.5 24 3 3.92～15.86 Sephadex G-100 40～120 4,000～ 1,000～ 超细 10～40 1,500,000 150,000 15～20 10.0±1.0 48 5 2.35～9.41 Sephadex G-150 40～120 5,000～ 1,000～ 20～30 超细 10～40 400,000 150,000 18～22 15.0±1.5 72 5 0.88～3.53 Sephadex G-200 40～120 5000～ 1000～ 30～40 10～40 800,000 200,000 20～25 20.0±2.0 72 5 0.39～1.57 2.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据 型号 排阻的下限 (分子量) 分级分离范围 (分子量) 膨胀后的床体积(ml/g干凝胶) 膨胀所需最少时间(室温,h) Bio-gel-P-2 1,600 200～2,000 3.8 2～4 Bio-gel-P-4 3,600 500～4,000 5.8 2～4 Bio-gel-P-6 4,600 1,000～5,000 8.8 2～4 Bio-gel-P-10 10,000 5,000～17,000 12.4 2～4 Bio-gel-P-30 30,000 20,000～50,000 14.9 10～12 Bio-gel-P-60 60,000 30,000～70,000 19.0 10～12 Bio-gel-P-100 100,000 40,000～100,000 19.0 24 Bio-gel-P-150 150,000 50,000~150,000 24.0 24 Bio-gel-P-200 200,000 80,000～200,000 34.0 48 Bio-gel-P-300 300,000 100～400,000 40.0 48 3．琼脂糖凝胶的技术数据 型号 琼脂糖含量 %（W/W） 排阻的下限 （分子量） 分级分离的范围（分子量） 生产厂家 Sepharose 4B 4 0.3×106～3×106 Pharmacia Sepharose 2B 2 2×106～25×106 Sagavac 10 10 2.5×105 1×104～2.5×105 Seravac Sagavac 8 8 7×105 2.5×104～7×105 Sagavac 6 6 2×106 5×104～2×106 Sagavac 4 4 15×106 2×105～15×106 Sagavac 2 2 150×106 5×105～15×107 Bio-gel A-0.5M 10 0.5×106 <1×104～0.5×106 Bio-Rad Bio-gel A-1.5M 8 1.5×106 <1×104～1.5×106 Bio-gel A-5M 6 5×106 1×104～5×106 Bio-gel A-15M 4 15×106 4×104～15×106 Bio-gel A-50M 2 50×106 1×105～50×106 Bio-gel A-150M 1 150×106 1×106～150×106 4．各处凝胶所允许的最大操作压 凝胶 最大静水压（kPa） Sephadex G-10 9.8 G-15 9.8 G-25 9.8 G-50 9.8 G-75 4.9 5．琼脂糖凝胶浓度与线性DNA分辨范围 凝胶浓度（%） 线性DNA长度（bp） 0.5 1000～30000 0.7 800～12000 1.0 500～10000 1.2 400～7000 1.5 200～3000 2.0 50～2000 6．染料在变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度 凝胶浓度（%） 溴酚蓝 二甲苯青FF 5．0 35bp 140bp 6．0 26bp 106bp 8．0 19bp 75bp 10．0 12bp 55bp 20．0 8bp 28bp 7．染料在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度 凝胶浓度（%） 溴酚蓝 二甲苯青FF 3.5 100bp 460bp 5.0 65bp 260bp 8.0 45bp 160bp 12.0 20bp 70bp 15.0 15bp 50bp 20.0 12bp 45bp 七、氨基酸的特性 氨基酸名称 三字母缩写 单字母缩写 质量 侧链电离的pHa值 丙氨酸（alanine） Ala A 89.09 精氨酸（arginine） Arg R 174.2 12.48 天冬酰氨（asparagine） Asn N 132.1 天冬氨酸（aspartic acid） Asp D 133.1 3.86 半胱氨酸（systeine） Cys C 121.12 谷氨酰胺（glutamine） Gln Q 146.15 谷氨酸（glutamic acid） Glu E 147.13 4.25 甘氨酸（glycine） Gly G 75.07 组氨酸（histidine） His H 155.16 6.0 异亮氨酸（isoleucine） lle I 131.17 亮氨酸（leucine） Leu L 131.17 赖氨酸（lycine） Lys K 146.19 甲硫氨酸（methionine） Met M 149.21 苯丙氨酸（phenylanaline） Phe P 165.19 脯氨酸（proline） Pro P 115.13 丝氨酸（serine） Ser S 105.06 苏氨酸(threonine) Thr T 119.12 色氨酸（tryptophan） Trp W 204.22 酪氨酸（tyrosine） Tyr Y 181.19 10.07 缬氨酸（valine） Val P 117.15 八、遗传密码 密码子的第二位 密码子的第一位（5’端） U C A G 密码子的第三位（3端’） U UUU Phe UCU Ser UAU Tyr UGU Gys U UUC Phe UCC Ser UAC Tyr UGG Gys C UUA Leu UCA Ser UAA 终止（赭石） UGA 终止（乳白） A UUG Leu UGG Ser UAG 终止（琥珀） UGG Trp G C CUU Leu CCU Pro CAU His CGA Arg U CUC Leu CCC Pro CAC His CGC Arg C CUA Leu CCA Pro CAA Gln CGA Arg A CUG Leu CCG Pro CAG Gln CGC Arg G A AUU Ile ACU Thr AAU Asn AGU Ser U AUC Ile ACC Thr AAC Asn AGC Ser C AUA Ile ACA Thr AAA Lys AGA Arg A AUG Met ACG Thr AAG Lys AGC Arg G G GUU Val GCU Ala GAU Asp GGU Gly U GUC Val GCC Ala GAC Asp GGC Gly C GUA Val GCA Ala GAA Glu GGA Gly A GUG Val GCG Ala GAG Glu GGG Gly G 九、常用酸碱技术参数 1．常见的市售酸碱的浓度 溶质 分子式 分子量 mol/L g/L 重量（%） 比重 配制mol/L溶液的加入量（ml/L） 冰乙酸 CH3COOH 60.05 17.40 1045 99.5 1.050 57.5 乙酸 60.05 6.27 376 36 1.045 159.5 甲酸 HCOOH 46.02 23.40 1080 90 1.200 42.7 盐酸 HCl 36.50 11.60 424 36 1.180 86.2 2.90 105 10 1.050 344.8 硝酸 HNO3 63.02 15.99 1008 71 1.420 62.5 14.90 938 67 1.400 67.1 13.30 837 61 1.370 75.2 高氯酸 HclO3 100.50 11.65 1172 70 1.670 85.8 9.20 923 60 1.540 108.7 磷酸 H2PO4 80.00 18.10 1445 85 1.700 55.2 硫酸 H2P｀O4 98.10 18.00 1776 96 1.840 55.6 氢氧化铵 NH4OH 35.00 14.80 251 28 0.898 67.6 氢氧化钾 KOH 56.10 13.50 757 50 1.520 74.1 1.94 109 10 1.090 515.5 氢氧化钠 NaOH 40.00 19.10 763 50 1.530 52.4 2.75 111 10 1.110 363.4 2．各种浓度的酸碱贮存液的近似pH值 溶质 1Na 0.1Na 0.01Na 0.001Na 乙酸 0.40 2.90 3.40 3.90 盐酸 0.10 1.07 2.02 3.01 硫酸 0.30 1.20 2.10 柠檬酸 2.10 2.60 氢氧化铵 11.80 11.30 10.80 10.30 氢氧化钠 14.05 13.07 12.12 11.13 碳酸氢钠 8.40 碳酸钠 11.50 11.00 J a.N为光量浓度[1N≈（1mol/L）×离子价数]。 |
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liuguilan
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