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山山水水金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】查耳酮合酶（CHS）和查耳酮异构酶（CHI）测定方法
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在黄酮代谢途径中的2个酶 查耳酮合酶（CHS）和查耳酮异构酶（CHI） 哪位牛人有它们的测定方法，光度计，hplc，凝胶都行。 多谢多谢！ |
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参考 Jez 和 Noel（2002）和 Fouché 和 Dubery（1994）的方法。 取 1 g 桃果实样品，加入提取液 1 mL [120 mmol/L K3PO4, 20 mmol/L β-巯基乙醇, 3 mmol/L EDTA, 2% (m/v) PVPP, 100 μmol/L 碘乙酸, pH 8.0]，研磨匀浆（4 ℃操作），然 后转移到 5 mL 提取液中，混匀后放置在 4 °C 下 30 分钟。接着将混合液 在 4 ℃下 12000×g 离心 20 min，取上清液作为粗酶液待测定。取 0.75 mL 的酶提液，加入 2 mL 混合液 [50 mmol/L Tris-HCl, pH 7.4, BSA 7.5 mg/mL, 50 mmol/L KCN,乙醇（1%）]，然 后加入 1 mg/mL 的查尔酮溶液 50 μL（最后浓度为 18.5 μmol/L），34 ℃水浴加热 30 min， 同时以蒸馏水作为空白对照。测定在 390 nm 波长处的吸光值的变化来表示 CHI 的酶活 性。每分钟吸光值变化 0.001 所需的酶量为 1 单位。 |
2楼2014-09-15 14:34:46
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