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coolgongjun

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】请教关于脂质体纯化的问题

由于实验室以前做我这个方向的很少,我又刚进来,所以有个有点幼稚的问题:文献上报道除去脂质体内未包裹的药物或者未镶嵌的修饰物都要用到sephadex或sepharose凝胶柱,这些柱子是用到凝胶渗透色谱中吗?那样的话恐怕有点难度因为凝胶渗透色谱很贵,实验室不可能买,学校的也不可能让我们换柱子吧。能够直接像柱色谱那样用吗？（我看的文献有些明确指出需要凝胶渗透色谱，也有的语焉不详只是说要通过凝胶柱来提纯。）谢谢！

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1楼 2010-08-21 18:50:57

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dingwjs

银虫 (小有名气)

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★
coolgongjun(金币+10):谢谢!辛苦了! 2010-09-02 08:06:02
qinhy(金币+1):多谢指教，欢迎常来药学版！ 2010-12-29 17:18:00

我做的是微量的，用离心机2000r/min转3分钟，脂质体就下来了，大点儿的柱子我不清楚，我没做过，不好意思
找了下以前的实验记录，你参考一下吧
凝胶微型柱的制备
原理：由于凝胶中有许多小孔，体积较大的脂质体不进入小孔而从间隙中先流出，而体积较小的未包裹的药物及杂质进入小孔后流出而达到分离的目的。
制备：取Sephagex G-50适量，填入1ml塑料注射器中，此注射器事先取芯后塞入一小块棉花。将注射器放入离心机中，再2000r/min离心3min，除去过量的生理盐水，柱床高度达0.8ml刻度线位置。
饱和微型柱
原理：由于凝胶表面上的许多位点能与脂质体膜相互作用结合，照成小量的脂质体丢失。因此用空白脂质体预先饱和柱的表面，避免由于吸附照成的脂质体丢失现象的发生。
操作：分取空白脂质体0.1ml，加到微型柱上，在2000r/min离心3min，再加入0.2ml的缓冲液洗涤微型柱。
分离纯化脂质体
将脂质体各取0.1ml置微型柱离心分离，收集第一管，理论上极为纯化的脂质体。