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shengkai.0

新虫 (初入文坛)

[交流] 凝胶色谱纯化多糖

请问用凝胶色谱纯化多糖用重蒸水做溶剂和洗脱剂行不行，收集液怎么检测？看了很多文献说是用苯酚硫酸法隔管检测，感觉很繁琐不好实施啊。请教各位大侠
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1楼 2010-08-16 11:41:09
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音
重蒸水不行，凝胶色谱还没见过有拿水做洗脱剂的，因为凝胶本来就有水交联度，例如sephadex LH-20 含水量是0.2，纯化多糖是把不同多糖一种一种分开，还是得到总多糖提取物
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Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
2楼2010-08-16 12:33:23
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shengkai.0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-08-16 12:33:23:
重蒸水不行，凝胶色谱还没见过有拿水做洗脱剂的，因为凝胶本来就有水交联度，例如sephadex LH-20 含水量是0.2，纯化多糖是把不同多糖一种一种分开，还是得到总多糖提取物

那凝胶装柱之前还不是可以用重整水泡凝胶使其溶胀，就是为了得到单一级分的多糖来进行检测，谢谢大侠指教
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3楼2010-08-17 09:16:13
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音
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Originally posted by shengkai.0 at 2010-08-17 09:16:13:


那凝胶装柱之前还不是可以用重整水泡凝胶使其溶胀，就是为了得到单一级分的多糖来进行检测，谢谢大侠指教

单一多糖自己装的玻璃柱很难得到，要用液相凝胶柱
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Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
4楼2010-08-17 12:53:20
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shengkai.0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-08-17 12:53:20:

单一多糖自己装的玻璃柱很难得到，要用液相凝胶柱

我自己买有机玻璃柱和专门的葡聚糖凝胶过柱可以纯化吧
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5楼2010-08-17 14:01:26
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音
引用回帖:
Originally posted by shengkai.0 at 2010-08-17 14:01:26:



我自己买有机玻璃柱和专门的葡聚糖凝胶过柱可以纯化吧

这个就像是硅胶柱和液相色谱柱的区别，你应该能明白其中的差异吧
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Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
6楼2010-08-17 14:04:24
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shengkai.0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-08-17 14:04:24:

这个就像是硅胶柱和液相色谱柱的区别，你应该能明白其中的差异吧

但是我看了很多外文文献上都是用Sephadex G凝胶色谱柱纯化多糖的，他们好像用的凝胶色谱仪，我就想自己做凝胶色谱柱纯化，现在就是不知道怎么确定条件
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7楼2010-08-17 15:33:57
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zhiyuan9565

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shengkai.0 at 2010-08-17 15:33:57:



但是我看了很多外文文献上都是用Sephadex G凝胶色谱柱纯化多糖的，他们好像用的凝胶色谱仪，我就想自己做凝胶色谱柱纯化，现在就是不知道怎么确定条件

楼主实验成功了吗？我现在也在做，本来也想用重蒸水做洗脱剂的，不知道行不行。
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8楼2010-09-16 15:56:08
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ytusgwl

新虫 (初入文坛)
我用的是0.5mol/L的NaCl,效果还可以
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9楼2010-11-23 20:56:33
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小蘑菇0018

木虫 (正式写手)
我一直都是做这个的，流动相用 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5等得NACL梯度洗脱，自动收集，每隔一个试管 检测，检测的时候，吸取200微升，加1毫升苯酚，5毫升浓硫酸。混匀后，490nm检测。这样 就有51个试管，对应51组吸光度。。
吸光度有小变大，在变小。。这样不就出风啦吗，吧分高的部分手机在一起 就:victoryk啦。
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一切顺利！
10楼2012-03-19 15:17:13
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