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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【分享】-三磷酸腺苷-答疑专帖,我也来玩~~已有39人参与

省得天天翻帖子看啦,直接post到这里~~~

自我介绍一下,我本科4年专业为生物技术,由于是比较基础的学科,所以基本上许多生物学领域的都有接触。现在研转了医学院的药理学,不过对临床医学所知甚少~基础方面由于和生物学想通,所以还是能应付一点

擅长领域:
1、核酸操作:包括纯化、扩增、质粒构建等
2、miRNA、siRNA方面的理论和技术
3、细胞生物学方面的理论和实验,从培养到后续的实验。目前做凋亡,比较熟
4、肿瘤方面:从分子到动物水平理论和技术,临床的不熟……
5、一点点生物信息学的知识
6、简单数据分析,实验设计等案头工作
7、试剂、耗材选购,因为我跟厂商代理商打交道比较多
8、另外杂七杂八的:了解一些生化、微生物方面的
9、另有诡异的问题也希望能够和大家一起探讨



[ Last edited by 三磷酸腺苷 on 2010-8-10 at 12:17 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
看天(金币+2):鼓励 2010-08-13 18:34:13
scelab(金币+2):酶连的事偶也很头疼。。。时间和温度怎么把握令人纠结。。。 2010-08-13 18:53:09
引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-08-11 19:46:46:
问一个迫切的问题,试剂盒上说转化是16度,30min
还说效果不好就直接16度,过夜,我不知道过夜是多长时间
7小时够不够?时间长了是不是会出问题啊?

不是转化,是连接
T4 DNA ligase在4度到室温都有活性
然而,由于连接的时候要考虑黏端互补配对的稳定性,虽然温度高的时候酶活高,但是黏端的互补也容易解链,所以目前的折中方案一般是16度连接5分钟到数小时

按照我的个人经验,如果连接过夜,一般最好是4度连接

过夜一般指超过12h,通常是14~16h
31楼2010-08-11 21:42:42
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查看全部 212 个回答

love_st

金虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
三磷酸腺苷同志的解答是非常专业的
2楼2010-08-10 12:38:08
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
对于引物设计知道的多么?  或者版内哪个大牛 最会引物设计?
6楼2010-08-10 16:23:26
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greendayguns

铜虫 (正式写手)

呵呵,我也是学生物的,多多指教,多多交流!!!
7楼2010-08-10 16:27:04
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