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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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[交流] 【分享】-三磷酸腺苷-答疑专帖，我也来玩~~已有39人参与

省得天天翻帖子看啦，直接post到这里~~~

自我介绍一下，我本科4年专业为生物技术，由于是比较基础的学科，所以基本上许多生物学领域的都有接触。现在研转了医学院的药理学，不过对临床医学所知甚少~基础方面由于和生物学想通，所以还是能应付一点

擅长领域：
1、核酸操作：包括纯化、扩增、质粒构建等
2、miRNA、siRNA方面的理论和技术
3、细胞生物学方面的理论和实验，从培养到后续的实验。目前做凋亡，比较熟
4、肿瘤方面：从分子到动物水平理论和技术，临床的不熟……
5、一点点生物信息学的知识
6、简单数据分析，实验设计等案头工作
7、试剂、耗材选购，因为我跟厂商代理商打交道比较多
8、另外杂七杂八的：了解一些生化、微生物方面的
9、另有诡异的问题也希望能够和大家一起探讨

[ Last edited by 三磷酸腺苷 on 2010-8-10 at 12:17 ]

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1楼2010-08-10 11:46:44

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5):good 2010-12-30 15:35:17

引用回帖:

Originally posted by richenim at 2010-12-30 00:12:51:
有两个问题要请教下LZ哦，
1、我去做流式，用长春新碱做阳性对照（10ppm，给药24h），但是结果测出来是我的药物的凋亡率不到1%，而且长春新碱的凋亡率才3%，检测的老师说细胞的状态很好，染料也染上了，我不知道 ...

第一个问题：
1、首先考查自己的模型是否已经建立好。通过染Hoechst，是否得到比较高的凋亡率（视野中，凋亡细胞/总细胞）
2、制备样品的时候是否注意规范的操作？比如：有没有收集上清中的凋亡细胞？用原培养基重悬消化的细胞的时候是否有加入终浓度为2%的BSA去保护细胞？有没有充分吹成单细胞？有没有注意避免引入EDTA……
3、试剂盒的问题。我们试过国产的试剂盒（凯基），就是做不出来东西，阳性对照都不行。后来换了进口的（贴R&D牌子的）就没有问题了
4、你是用Annexin V/PI法吧。Sub G1法不推荐……根本就不能用于研究凋亡的技术。
5、空泡状，就是看到胞体里头有好多透明小泡那种

第二个问题：
1、这个凋亡是什么通路依赖的？死亡受体通路还是线粒体通路还是都有？可以使用Cas-9和Cas-8的活性测定来分辨
2、回答了第一个问题之后再根据实际情况设计实验吧，暂时不说那么多。不然都够写个综述了……