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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受

[交流] 【分享】-三磷酸腺苷-答疑专帖，我也来玩~~已有39人参与

省得天天翻帖子看啦，直接post到这里~~~

自我介绍一下，我本科4年专业为生物技术，由于是比较基础的学科，所以基本上许多生物学领域的都有接触。现在研转了医学院的药理学，不过对临床医学所知甚少~基础方面由于和生物学想通，所以还是能应付一点

擅长领域：
1、核酸操作：包括纯化、扩增、质粒构建等
2、miRNA、siRNA方面的理论和技术
3、细胞生物学方面的理论和实验，从培养到后续的实验。目前做凋亡，比较熟
4、肿瘤方面：从分子到动物水平理论和技术，临床的不熟……
5、一点点生物信息学的知识
6、简单数据分析，实验设计等案头工作
7、试剂、耗材选购，因为我跟厂商代理商打交道比较多
8、另外杂七杂八的：了解一些生化、微生物方面的
9、另有诡异的问题也希望能够和大家一起探讨

[ Last edited by 三磷酸腺苷 on 2010-8-10 at 12:17 ]

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1楼2010-08-10 11:46:44

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

hnndpt

铁虫 (正式写手)

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专业: 植物遗传学

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-10-07 23:10:10

To amplify 159-bp of the DBD, two degenerate `universal' MYB primers,COT20 (5¢-GGNAARAGYTGYMGITTRAG-3¢

and COT21 (3¢-GGNCCKKCTTGTCTRTTRS-5¢

were designed based on the highly conserved stretches coding for the peptides GKSCRL and PGRTDN, respectively (Fig. 1a). Using 25 ll of recombinant
phage (3.4 ´ 107 pfu/l) from the same unampli®ed library as the template, 。。。。。。反应条件省略。。。. The 159-bp amplicon was cloned into the pT7Blue TA-cloning vector and transformed into competent E.
coli NovaBlue cells (Novagen). Nucleotide sequencing (Sanger et al. 1977) of 24 independent transformants identi®ed a total of six different MYB DBDs. Equal amounts of the 159-bp amplicon from each of the six PCR clones, released by EcoRI digestion, were combined in a heterogeneous pool of DBD sequences for use as a homologous hybridization probe.
我想问个问题：24 independent transformants 是怎么来的？
2.设计简并引物扩增出来的序列，怎么判断出是几个不同的片段？我看的几篇文章中都是直接连接入载体，然后挑选N个克隆测序，这一点有点不太明白，是否随机挑选克隆？这样会不会导致克隆出来的不同片段会被遗漏？