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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物化学 » 【求助】求助：液相 吸光度很低 怎么回事？
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doxw0323

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最后两个峰还可以，可以用紫外做下谱图，看在什么波长吸光度更大，选择合适的波长，还可以调整流动相，不过改变流动相会改变出峰。
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随和不随意，乐观不主观。
11楼2010-08-09 21:57:56
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whutxd5

引用回帖:
Originally posted by jyx55 at 2010-08-09 14:15:08:
哪几个峰是啊？
浓度的话，要看检测限、线性范围、精密度合不合格吧

20-40分钟内出现的几个峰都是我想要的

20-40分钟内的峰，方法学考察肯定要做，我想先按照文献上的方法做好液相条件，再做液质联用，确定了物质之后再买标品进行定量
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12楼2010-08-10 00:09:22
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whutxd5

引用回帖:
Originally posted by doxw0323 at 2010-08-09 21:57:56:
最后两个峰还可以，可以用紫外做下谱图，看在什么波长吸光度更大，选择合适的波长，还可以调整流动相，不过改变流动相会改变出峰。

20-40分钟内出现的几个峰都是我想要的

20-40分钟内的峰，方法学考察肯定要做，我想先按照文献上的方法做好液相条件，再做液质联用，确定了物质之后再买标品进行定量
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13楼2010-08-10 00:09:43
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whutxd5

引用回帖:
Originally posted by drugmen at 2010-08-09 15:52:33:
请LZ说下要考察的是哪些峰？工作站应该能看到数据的吧。

20-40分钟内出现的几个峰都是我想要的

20-40分钟内的峰，方法学考察肯定要做，我想先按照文献上的方法做好液相条件，再做液质联用，确定了物质之后再买标品进行定量
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14楼2010-08-10 00:09:58
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whutxd5

引用回帖:
Originally posted by chenjiajiang198 at 2010-08-09 21:01:47:
LZ 你是想做图谱分析还是要确定的做一个物质啊 要是做图谱分析的话 你这个分离度不行的

20-40分钟内出现的几个峰都是我想要的

20-40分钟内的峰，方法学考察肯定要做，我想先按照文献上的方法做好液相条件，再做液质联用，确定了物质之后再买标品进行定量
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15楼2010-08-10 00:10:17
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whutxd5

引用回帖:
Originally posted by dayao at 2010-08-09 21:48:04:
是最大吸收波长下的图吗？还是浓度低了？？？
感觉好多峰没怎么分开

20-40分钟内出现的几个峰都是我想要的

20-40分钟内的峰，方法学考察肯定要做，我想先按照文献上的方法做好液相条件，再做液质联用，确定了物质之后再买标品进行定量
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16楼2010-08-10 00:10:33
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whutxd5

HPLC做得不多，不是很了解这方面的知识，我用植物叶片提取的，从叶片质量和提取液体积之比来看，浓度已经不小了，可能是物质本身含量比较少，我是根据文献上的方法，在洗脱梯度上又做了调整，可能是这些类黄酮的极性太相似的缘故，峰总是分不开，应该如何富集样品和增大分离度呢？

20-40分钟内出现的几个峰都是我想要的

20-40分钟内的峰，方法学考察肯定要做，我想先按照文献上的方法做好液相条件，再做液质联用，确定了物质之后再买标品进行定量


请大家帮忙，谢谢！！！
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17楼2010-08-10 00:12:11
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drugmen

金虫 (正式写手)
★ ★
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karl2100(金币+1):谢谢回帖！ 2010-08-12 01:24:31
检测器是什么检测器？紫外还是DAD的？
极性相似导致的峰分不开，那么就要考虑流动相的溶剂了，先调比例，实在不行再换试剂。跑梯度就带有改变流动相极性的意思了。
做植化会经常接触液相的。
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本人顶贴从不吝啬，楼主要多发好贴；反正又不是扣我金币。
18楼2010-08-10 14:33:08
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whutxd5

引用回帖:
Originally posted by drugmen at 2010-08-10 14:33:08:
检测器是什么检测器？紫外还是DAD的？
极性相似导致的峰分不开，那么就要考虑流动相的溶剂了，先调比例，实在不行再换试剂。跑梯度就带有改变流动相极性的意思了。
做植化会经常接触液相的。

样品浓度  大约是20mg/ml

我用的是265nm的，但是扫描了一个范围是250-300nm的，发现270nm下各峰的吸光度大些

我想做图谱分析，不知怎样增大分离度呢？我用的是乙腈和PH4的甲酸水做梯度。

我觉得最后那两个峰像溶剂峰


是265nm下的，扫描是在250-300nm，发现在270nm的吸光度要大些，这个下次会改进的。中间的峰很密集，可我不知道怎样改善。

DAD的监测器，我是用乙腈和甲酸水做的梯度，乙腈从初始的10%到最后的100%，应该如何让调整流动相比例才能分开这些极性相似的峰呢？中间有两个好像是同分异构体的峰。
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19楼2010-08-12 00:26:54
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