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sqhnsd

金虫 (正式写手)

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Originally posted by 皖山潜凤 at 2010-08-13 14:14:57:





看着图确实很怪异,  怎么都不到基线呢?
你为啥不用
A液: 100%水 0.1% TFA
B液: 100% 乙腈   0.1% TFA

这样的话,在乙腈达到100%的时候,一切疏水的冻洗都应该下来,如果还不回到基线,那就说 ...

电洗脱的时候,里面有200mM的glycine,在丙酮沉淀之前我还对样品进行冻干以提高蛋白浓度,增加 actone precipitation回收率。但是,当弄干之后,盐分盐浓度就很高了(200mM其实已经比较高了),高盐情况下去除SDS效果不好(文章推荐除盐)。还有,大部分蛋白在0-60%乙腈的条件下都会洗掉,90%跟100%差别不大。另外,actone precipitation可以去除大部分SDS,因此必须放到RP-HPLC之前。你说的很对,我也觉得丙酮沉淀之后的蛋白,怪怪的

[ Last edited by sqhnsd on 2010-8-13 at 15:14 ]
11楼2010-08-13 15:11:38
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liyan20220

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主最后结果如何?我也在做蛋白,用的C18柱子,分离产量很低,也郁闷呢
12楼2013-04-22 18:42:40
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冰封de沉默

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by liyan20220 at 2013-04-22 18:42:40
楼主最后结果如何?我也在做蛋白,用的C18柱子,分离产量很低,也郁闷呢

我下载也在做蛋白,用的也是C18柱,分离效果不好,而且出来的图谱和楼主的差不多~~相当郁闷,交流一下吧~你用的什么方法做的前处理啊?
13楼2014-03-17 21:39:27
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董先森灬

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by sqhnsd at 2010-08-13 15:07:10
呵呵,谢谢。我问了一下ABI的技术支持,他认为跟分子量分离效果相关的因素除了Pore size 之外,还跟固定相的C含量有关,他建议用下C4试试,好比C18不能分离蛋白一样的道理。280我用了,尽管信号很低,但是分离 ...

您好,我最近也在用rp-hplc测定蛋白,想跟您讨论一下,可以私聊吗

发自小木虫IOS客户端
14楼2018-01-22 15:04:10
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