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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】RP-HPLC分离蛋白质样品遇到的奇怪现象
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 皖山潜凤 at 2010-08-13 14:14:57:





看着图确实很怪异，  怎么都不到基线呢？
你为啥不用
A液： 100%水 0.1% TFA
B液： 100% 乙腈   0.1% TFA

这样的话，在乙腈达到100%的时候，一切疏水的冻洗都应该下来，如果还不回到基线，那就说 ...

电洗脱的时候，里面有200mM的glycine，在丙酮沉淀之前我还对样品进行冻干以提高蛋白浓度，增加 actone precipitation回收率。但是，当弄干之后，盐分盐浓度就很高了（200mM其实已经比较高了），高盐情况下去除SDS效果不好（文章推荐除盐）。还有，大部分蛋白在0-60%乙腈的条件下都会洗掉，90%跟100%差别不大。另外，actone precipitation可以去除大部分SDS，因此必须放到RP-HPLC之前。你说的很对，我也觉得丙酮沉淀之后的蛋白，怪怪的

[ Last edited by sqhnsd on 2010-8-13 at 15:14 ]
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11楼2010-08-13 15:11:38
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liyan20220

木虫 (著名写手)
★
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楼主最后结果如何？我也在做蛋白，用的C18柱子，分离产量很低，也郁闷呢
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12楼2013-04-22 18:42:40
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冰封de沉默

新虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by liyan20220 at 2013-04-22 18:42:40
楼主最后结果如何？我也在做蛋白，用的C18柱子，分离产量很低，也郁闷呢

我下载也在做蛋白，用的也是C18柱，分离效果不好，而且出来的图谱和楼主的差不多~~相当郁闷，交流一下吧~你用的什么方法做的前处理啊？
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13楼2014-03-17 21:39:27
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董先森灬

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
10楼: Originally posted by sqhnsd at 2010-08-13 15:07:10
呵呵，谢谢。我问了一下ABI的技术支持，他认为跟分子量分离效果相关的因素除了Pore size 之外，还跟固定相的C含量有关，他建议用下C4试试，好比C18不能分离蛋白一样的道理。280我用了，尽管信号很低，但是分离 ...

您好，我最近也在用rp-hplc测定蛋白，想跟您讨论一下，可以私聊吗

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14楼2018-01-22 15:04:10
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