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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【分享】reasonspare生物答疑专贴>>>>你提问题，我来答。
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reasonspare

木虫 (著名写手)

[交流] 【分享】reasonspare生物答疑专贴>>>>你提问题，我来答。 已有28人参与

如果你想你的问题由针对性地解答，或者苦于你的问题没有人回复：
那么请将你的问题将给reasonspare听听，或许他有另一番见解。

所有解答不要任何金币，（当然你给我也要）
所有回答不一定正确（解释权 归reasonspare 所有，并不保证完全正确）
所有提问一定回答（请不要灌水）

木虫ID: reasonspare
木虫简历:小木虫，或者baidu 就能找到。

答疑范围：
1：课题设计：
2：试验设计：
3：试验理论；
4：新技术尝试；
5：实验方法。

专业领域：
生物学；微生物学鉴定，病毒学（仅限于植物病毒），农学；环境植病；数据处理；仪器分析（限于色谱，和质谱）。

特色服务：
数据处理：将你的数据粘贴过来，我帮你分析：如统计学：SPSS SAS, 系统发育学：Phlip, PAUP. 蛋白质组学：MASCOT等等。
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zongyu_1986 yuehongshan

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1楼 2010-08-07 11:07:34
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reasonspare

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+8):good！ 2010-08-15 12:40:44
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-08-07 20:53:27:
我想从一种抗旱植物中找到一些抗旱基因。

请问有哪些方法？

我的思路是通过GENEBANK 找相似物种的抗旱序列，然后设计简并引物P。

可否有其他方法？

多谢多谢！！！

我想你的问题：分为几个部分来分析：今天帖子写不完：
Ｐａｒｔ　１
单独找一些特殊表型（如耐盐抗旱，耐酸，耐高温）的基因的方法很多：
具体来讲分两种路线：Bottom-top, TOP-DOWN
前者：主要从转录水平入手：
ｃＤＮＡ－ＡＦＬＰ：找到差异ｍＲＮＡ的片断，测序后找全长基因，以及上下游的调控基因。
ＳＳＨ　（消减杂交），一种ＡＦＬＰ的提高版，功能类似。
上面两种方法一般实验室都能完成。
找到基因后：首先要看其功能验证：（也就是TOP）,能不能表达，表达出什么样的蛋白，转入模式生物的表型，进行突变，和恢复突变。

后者：主要从蛋白入手：
２Ｄ－ＭＳ／ＭＳ，双向电泳找差异，差异蛋白点通过质谱获得氨基酸序列从而进行蛋白鉴定。然后看通过ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ进行验证，然后看看ＲＮＡ转录水平。和相关的调节基因。

ＭｕｄＰＩＴ　（多维蛋白质鉴定技术），不需要２Ｄ，通过ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ实现高通两的蛋白组学ｐｒｏｆｉｌｅ．

这一部分都是最基本找差异蛋白的方法，当然还有很多其他的方法，都可以用。


ＰＡＲＴ　２　

找一些抗旱植物中抗旱基因

这个相对容易，只要你的研究材料合适就好。

Part 3

通过GENEBANK 找相似物种的抗旱序列，然后设计简并引物P。


这个问题，的确省了不少麻烦，值得做，但是我有一个顾虑：与耐旱有关的基因很多，你找那个，你找几个，那几个最终确定下来进行进一步研究，要想清楚。

建议：
３－５备选基因：
设计通用引物
ＰＣＲ扩增。
克隆测序
设计特意引物（两种引物都要考虑如果可能的话，２００左右的做ｑＰＣＲ，和基因全场）
ＲＴ－ＰＣＲ
这一部的结果，就初步证明的你筛选的基因是否存在。
ＲＴ－ＰＣＲ
不同处理的基因表达情况。
到这里你就可以说你的基因和抗旱是否有关了。
－－－－

[ Last edited by reasonspare on 2010-8-11 at 07:20 ]
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11楼2010-08-10 11:54:24
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！

1

lstt09nk:是有点越界,呵呵，不过全当占位吧，以后有问题在贴过来~~r版应该不会介意的~~ 2010-08-07 12:29:39
我有一个疑问，为什么小木虫的站内搜索是baidu还不是google呢？越范围了好像……











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回复见8楼 by reasonspare
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[ Last edited by reasonspare on 2010-8-10 at 11:01 ]
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2楼2010-08-07 12:27:31
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njauzx

金虫 (小有名气)

0.5

我想问光合作用相关的，前几天的帖子。想做个类似的课题设计，不过还没想明白。谢谢！
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2271980&fpage=1




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回复见9楼 by Reasonsapre

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[ Last edited by reasonspare on 2010-8-10 at 11:29 ]
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3楼2010-08-07 12:53:10
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看天

木虫 (知名作家)

1

顶 我也要学习 模仿
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
4楼2010-08-07 13:04:55
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