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wfkou

金虫 (初入文坛)

[交流] 求助!高效感受态细胞制备!

求助!高效感受态细胞制备!希望能达到10*8~10*9的转化效率!希望各位同仁给予指点!小生在这里谢谢各位了!谢谢!
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kwf99

金虫 (小有名气)

谢谢各位!

谢谢各位兄弟姐妹!我现在是按照《分子克隆》第三版的低温培养方法,就是摇菌温度达不到18度,都是20度以上,OD是0.5左右,用热击法转化,但是效率还是很低,达不到10*8,不知道是什么原因?急啊!
6楼2006-04-17 19:41:52
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lwrence

银虫 (初入文坛)


BlueGuy(金币+1):谢谢
你也没说是做大肠杆菌的还是其他菌的,是电转的还是钙转的。
一般大肠杆菌感受态只要控制转接后的OD值就行了,我做钙转感受态时一般以1%接种量转接250ml瓶子,瓶子里装50mlLB,OD达到0.6时转入50ml离心管,4度5000转离心5min钟后,加入冰冷的40ml氯化钙悬浮,5000转8min,再次加入20ml氯化钙,冰浴30min,5000转离心8min后加入1.5ml的氯化钙悬浮,四度冰箱过夜,这样的效率是最高的。用不完的可以加入等体积的50%甘油混匀后按50ul分装,置-80度冰箱,两三个月效率都很高的。
2楼2006-04-13 21:38:17
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wj_21cn

木虫 (正式写手)

超级感受态阿。
呵呵,你把原来要用带CaCl的地方用LiCl就应该差不多了。
可以看分子克隆,上面有超级感受态的做法。
3楼2006-04-13 21:59:15
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freehorse

0.5

对,我们实验室就是按照分子克隆上介绍的方法制备的(超级感受态),转化效率很高,所以挑阳性克隆时让师兄们不知从何下手了,嘻嘻
4楼2006-04-17 16:34:26
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