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windli

木虫 (职业作家)

[交流] WATERS 2695-2487 HPLC 仪器操作简明流程

WATERS  2695-2487  HPLC 仪器操作简明流程

1、2487检测器开、关机及使用：
打开电源      仪器自检1-2min      预热5min      稳定约30min      设定通道、波长模式、波长（也可在工作站上设置）          回零（Auto Zero）      分析检测       实验完毕关掉电源开关即退出。

2、2695分离单元使用操作：
1)        开机自检
打开电源开关，仪器开始自检（4-5min），待屏幕上方出现“Idle”字样表示自检成功。
2)        脱气（Degas）
    按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status（1）”界面，移动光标   至“Degasser Mode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。
3)        设定柱温（可选项）
在“Status（1）”界面，移动光标至“Col Htr Set”，输入目标温按Enter即可。（可在工作站方法中设置）
4)        Prime Seal Wash（清洗柱塞杆）
按“Menu/Status”键回到“Menu”界面，按下排功能键“Diag”，然后再按下排功能键“Prime Seal Wsh”，“Start”，冲洗1~2min后，“HALT”，“CLOSE”。
5)        Wet Prime
    在“Status（1）”界面中“Composition”下，选择将用到的溶剂通道为“100%”，按液晶屏幕右下角“Direct Function”键，移动光标选择“2 Wet Prime”，“OK”，流速及时间可使用默认值，也可自行设定（如：5ml/min，3min），“OK”即可。
将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。
6)        Purge Injector（注射器排气泡及清洗）
进入“Direct Function”界面后，选择“3  Purge Injector”，“OK”，默认数值为6，“OK”。
7)        Prime Needle Wash（清洗注射针）
进入“Diagnostics”界面，按下排功能键之“Prime Ndl Wsh”，“Start”，默认30秒钟，“Close”，即可返回“Diagnostics”界面。
注：以上4）-7）为溶剂系统前处理过程，建议每天开机后依次进行。若发现注射器中有气泡，则可重复6）直至排除。如果流动相中含有盐类，则实验结束后必须用水清洗柱塞杆（即操作4））。
8)        平衡柱子
在“Status（1）”界面上，按流动相比例设定各通道溶剂比例后，再Wet Prime操作一次，然后设置流速，平衡色谱柱30-60min。
9)        放置样品
拉开样品转盘舱门，将盛有待测样品溶液的样品瓶放入转盘中，记下样品瓶号，关上舱门。
10)        检测样品
打开工作站，设置仪器方法、方法组、自动进样序列等，监视基线、检测样品。
11)        分析处理数据、打印报告
12)        清洗注射器、针、柱塞杆
参见上述4)、7)。
13)        清洗色谱柱
用水冲洗柱子40-60min（视柱子规格不同，流速通常1ml/min）；然后用甲醇或乙腈冲洗柱子40min（流速1ml/min）。
14)        关机
关掉电源开关。
另外有相关注意资料


1、        检测器波长范围：190-700nm               
2、        可以进行紫外扫描（scan），参考媒体播放
3、        清洗柱塞杆的溶剂可以用水，或5%-10%甲醇（抑菌）
4、        清洗针的溶剂可以根据样品溶解性选择，如甲醇，或异丙醇-水（1：1）
5、        清洗柱塞杆操作“prime seal wash”“start”后，看有溶液流出，持续一段时间后，按下“HALT”，“CLOSE” 冲洗1-2min即可，1次。可以每天开机后进行，或结束实验时进行。流动相中有盐，结束实验时一定要清洗。仪器不自动进行。
6、        每次仪器打开后，会自动进行的操作有：①START UP DIAGNOSTICS; ②WATERS ALLIANCE SEPERATIONS MODULE, REV2.03, INITIALIZING;③INITIALIZING NEEDLE ＆ SYRINGE; ④INITIALIZING CAROUSELS; ⑤INITIALIZING SOLVENT SYSTEM; ⑥IDLE  （在屏幕上有显示）
7、        “实验结束后要purge injector”，1次即可，包括了“purge sample loop”。
8、        在线脱气机打开后，开始时运行加速，使压力很快降到1.0psi以下，然后维持在0.5psi左右。
9、        怀疑管路堵塞可卸下单向阀、在线过滤器进行清洗。单向阀安装注意方向。
10、        本仪器配置注射器体积250ul，样品环100ul。可在“CONFIG”中查看。
11、        样品环体积可换；但同时注射器体积也应匹配。注射器体积有25、100、250、2500等。
12、        在检测器中“DIAG”中可以查看“SAMPLE ENERGY”、“REFERENCE ENERGY”等参数，了解紫外灯的使用情况。
13、        检测器要经常用“SHIFT +3”来校正波长，保证其准确性。每1-2周检查1次。先清洗检测池。清洗检测池可以在线进行，不用卸下；具体操作是，用双向接头替代色谱柱，流速设置为1ml/min，用0.45m滤膜过滤过的甲醇冲洗15min-30min即可达到清洗目的。
14、        2台仪器可以共用一个工作站（工作站升级为多系统）；但2台仪器不能同时用一个项目采集样品。
15、        基线平衡后纵坐标可达到小数点后第4位（很平稳）。
16、        可单针自动进样，也可以成组进样；成组进样需要编辑样品组方法（包括瓶号、样品名、进样体积、进样次数、功能、方法组/报告方法、下一针延迟等）。样品组方法可保存、调用。（ctrl +D可以用于列复制是“下同”之意。）
17、        样品组方法里的“功能”一项，有“平衡”及“平衡色谱柱”两个选项，其功能不同；若仪器方法选用梯度，用“平衡色谱柱”可以在进样前运行梯度来平衡柱子；而如果选用“平衡”则只是按照初始梯度条件等度平衡柱子。（当然，如果是用等度的流动相条件，则两者没有区别）
18、        编辑仪器方法时注意：
1)        2695“通用”标签下，“单次输送体积”数值根据流动相流速不同有别：流速＜0.3时，选25；流速在0.3-1.0时，选50；流速＞1.0时，选100。“针头深度”除样品瓶选用内插管时设为2，其余均用默认值0。
2)        “脱气”标签下，“脱气模式”选择“开”即可。
3)        “流量”中编辑流动相比例及梯度条件；“温度”标签下，可以启用柱温设置“目标柱温”等。
4)        “溶剂”为可选备注项。其余“事件”、“通道”不用设置。
5)        2487在“通用”标签下选择“波长模式”，启用通道；在相应“通道1”或“通道2”下设置波长即可，其余不动。
6)        AUFS值在此仪器中没有启用，不改变面积大小。
19、        注射器中的气泡快速有效排除方法：可以小心的卸下注射器抽吸甲醇排除气泡后，注射器中保留少量溶剂，做“purge injector”小心安装上，再做几次“purge injector”观察没有气泡即可。
其他方法，如WATERS 工程师讲可以在“purge injector”开始后、注射器杆向上时，拧掉下边螺丝，上下抽推排除气泡。溶剂用甲醇较好；不用同时拧掉上方注射器。
20、        检测器开机自检结束时有时会提示“calibration differs.521nm”,这是仪器自检后提示与上一次自检结果有出入，原因很多，可能是检测池中有小气泡，检测池污染，也可能是流路中溶剂有变动。分析原因，清洗检测池，排气泡，或者请工程师帮助。
21、        要注意样品瓶中死体积大小，防止供试液体积不足，针头吸不到。

供大家参考，希望对大家工作有所帮助
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1楼 2006-04-11 21:09:33
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