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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】4kb片段的连接
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
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引用回帖:
Originally posted by xucan0901 at 2010-07-30 14:46:08:

你的意思是说，大片段的连接只是概率和运气的问题了吗？

我已经重复好几次了，每次的结果都一样。不知为何
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
11楼2010-07-30 14:48:22
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fppzcz

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
感觉你可以做一个对照连接到其他载体上比如PET载体，毕竟在T载上可能假阳性概率很高，还有具体操作也要注意下保证挑选的是同一株菌，转化出来做先做菌落PCR同时必须同步转接另外平板上，这样最好，有时候提取质粒酶切也可能存在问题的。
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12楼2010-07-30 14:49:50
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xucan0901

铜虫 (初入文坛)
还有就是，大片段的连接，会不会和dna的空间结构也有影响！
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13楼2010-07-30 14:52:48
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xucan0901

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by fppzcz at 2010-07-30 14:49:50:
感觉你可以做一个对照连接到其他载体上比如PET载体，毕竟在T载上可能假阳性概率很高，还有具体操作也要注意下保证挑选的是同一株菌，转化出来做先做菌落PCR同时必须同步转接另外平板上，这样最好，有时候提取质粒 ...

你说的我也做过，也不成功，感觉是pcr两端的酶切不太好切，
你说的提质粒怎么可能有问题呢，大片段的插入提取质粒无需酶切应该就很好分辨吧，反而菌落pcr却不稳定的吧。
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14楼2010-07-30 15:01:46
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fppzcz

铜虫 (初入文坛)
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引用回帖:
Originally posted by xucan0901 at 2010-07-30 15:01:46:

你说的我也做过，也不成功，，
你说的提质粒怎么可能有问题呢，大片段的插入提取质粒无需酶切应该就很好分辨吧，反而菌落pcr却不稳定的吧。

就是担心可能做菌落PCR挑出的不是同一株菌。。感觉是pcr两端的酶切不太好切，这一点再设计酶切位点时候没有问题的话应该是没有问题的，
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15楼2010-08-01 15:17:14
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