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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
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Originally posted by xucan0901 at 2010-07-30 14:46:08:

你的意思是说,大片段的连接只是概率和运气的问题了吗?

我已经重复好几次了,每次的结果都一样。不知为何
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
11楼2010-07-30 14:48:22
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fppzcz

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
感觉你可以做一个对照连接到其他载体上比如PET载体,毕竟在T载上可能假阳性概率很高,还有具体操作也要注意下保证挑选的是同一株菌,转化出来做先做菌落PCR同时必须同步转接另外平板上,这样最好,有时候提取质粒酶切也可能存在问题的。
12楼2010-07-30 14:49:50
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xucan0901

铜虫 (初入文坛)

还有就是,大片段的连接,会不会和dna的空间结构也有影响!
13楼2010-07-30 14:52:48
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xucan0901

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by fppzcz at 2010-07-30 14:49:50:
感觉你可以做一个对照连接到其他载体上比如PET载体,毕竟在T载上可能假阳性概率很高,还有具体操作也要注意下保证挑选的是同一株菌,转化出来做先做菌落PCR同时必须同步转接另外平板上,这样最好,有时候提取质粒 ...

你说的我也做过,也不成功,感觉是pcr两端的酶切不太好切,
你说的提质粒怎么可能有问题呢,大片段的插入提取质粒无需酶切应该就很好分辨吧,反而菌落pcr却不稳定的吧。
14楼2010-07-30 15:01:46
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fppzcz

铜虫 (初入文坛)


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Originally posted by xucan0901 at 2010-07-30 15:01:46:

你说的我也做过,也不成功,,
你说的提质粒怎么可能有问题呢,大片段的插入提取质粒无需酶切应该就很好分辨吧,反而菌落pcr却不稳定的吧。

就是担心可能做菌落PCR挑出的不是同一株菌。。感觉是pcr两端的酶切不太好切,这一点再设计酶切位点时候没有问题的话应该是没有问题的,
15楼2010-08-01 15:17:14
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