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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】我想我是疯掉了，如此疯狂的PCR
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wjw992008 at 2010-07-28 17:25:49:
经验告诉我们，如果引物是特异的，弱弱的PCR扩增条带十有八九是假阳性。
能否告知做的是什么实验？因为我之前也有这种情况，假阳性转化克隆子扩增出相应的弱带而且有杂带，后来得到的阳性克隆子都是相当特异的一 ...

嗯，做的是真菌的电转，有那么一次，同一个样，之前P的条带是弱弱的，后来又P出一次亮带，搞得我都有点不清楚是假阳性还是PCR不稳定的问题了……
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21楼2010-07-29 08:28:14
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2010-07-29 00:16:01:
我有过类似经历。更换了新的buffer和DNTP解决了，后来发现是DNTP太久的缘故.good luck

最晕的是，我这次用的还是公司新送来的酶，dNTP,以及buffer……P了两次，两大白板啊，那个伤心……都怀疑那公司给我送的是不是过期的产品了……
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22楼2010-07-29 08:30:29
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lipishun

金虫 (小有名气)
★ ★
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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-02 22:54:27
引用回帖:
Originally posted by 雨后郁金香 at 2010-07-28 15:14:22:


嗯，谢谢……
请问下：我是提取的疑似转化子的基因组DNA 做PCR，条带很弱是不是可以说是假阳性啊？

有可能，但是你应该设立一个原始材料为阴性对照。如果阴性对照没有就说明可能是阳性的。
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23楼2010-07-29 11:46:41
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lipishun at 2010-07-29 11:46:41:

有可能，但是你应该设立一个原始材料为阴性对照。如果阴性对照没有就说明可能是阳性的。

嗯，这个有设置，现在就是之前可以P出来的，现在都P不出来，连弱的条带都没有……今天重新做了，把什么都换了，还是没有奇迹发生……
补充下，我这个PCR是验证转化有没有成功，如果有转化进去是能够验证到抗性基因的存在，原始菌株是没有这个基因的……
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24楼2010-07-29 13:35:48
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
不要急
找原因吧
PCR做不出也正常啊
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25楼2010-07-29 15:42:50
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ymzfeng at 2010-07-29 15:42:50:
不要急
找原因吧
PCR做不出也正常啊

嗯，在找原因，换个条件试试看
刚老板上来问文章的事情了，唉，那个伤心……
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26楼2010-07-29 17:51:17
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mqhero

木虫 (正式写手)

小木虫二炮总司令
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Miss Yao？
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27楼2010-09-02 12:58:16
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怎么都行

银虫 (小有名气)
★
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条带弱，试试降落PCR吧
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28楼2010-09-02 13:01:39
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gncaas

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-02 22:54:39
建议楼主换个好点的taq酶，我以前有一段时间扩的不清楚，换引物、变体系都扩不好，最后换了各taq没，扩的清楚了，换一个扩增能力强的，进口的酶试试，我推荐用promega的GoTaq，挺好用的
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29楼2010-09-02 15:40:45
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yangjie86

金虫 (正式写手)
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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-02 22:54:46
是不是用的ddH20有问题呀？还有就是要留意枪头是否碰到其他东西。LZ加油，PCR重复一次很快的，莫急呀！
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莫回头看背后的身影。
30楼2010-09-02 16:27:17
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