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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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ganggang6667

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】支原体检测 已有11人参与

最近养细胞发现有支原体感染，谁有快速检测支原体的方法？分享一下！！
谢谢~~~~
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1楼 2010-07-25 13:06:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

烟大考研

金虫 (正式写手)
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lstt09nk(金币+4):很详细，新小牛人要加油哦~~呵呵 2010-07-26 17:03:12
对于支原体污染的细胞，可以采取补救措施：
1 抗生素排除法：可以用5-10倍于常用量的冲击法，加入高浓度抗生素后作用24-48小时，再换入常规培养液，有时可能有效。推荐用量：庆大霉素 200ug/ml ,四环素10ug/ml ，卡那霉素50ug/ml 。对于支原体污染抗生素应用，预防性应用比污染后使用好。
2 加温除菌：根据支原体耐热性能差的特点。将受支原体污染的细胞置于41度中作用5-10小时可以杀灭支原体。但由于41度对培养细胞本身也有较大的影响，故处理前，应先进行预试验，确定出最大限度杀伤支原体而对细胞影响较小的处理时间
支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。
组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染；严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体最突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如 -内酰胺类、万古霉素等完全不敏感；对多粘菌素（polymycin）、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体最有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些氟喹诺酮；其他类抗生素如氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小抑制作用，所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。 InvivoGen公司研究开发的新一代支原体抗生素M-Plasmocin能有效地杀灭支原体，不影响细胞本身的代谢，并且用M-Plasmocin处理过的培养细胞，不会重新感染支原体。
红霉素有效，而且不影响细胞生长。细胞刚开始被支原体污染，细胞生长极为缓慢，而且状态不好，细胞之间及底部总有一些亮晶晶的颗粒状物质，换液后好些，但过2天又会增多，培养液清亮，严重时象一层细沙铺在瓶底。刚开始以为是消化过头引起的细胞的碎片和细胞内的颗粒，后来发现与胰酶消化无关。使用红霉素（就在医院的门诊购买，很便宜）后这种现象明显好转，背景干净，细胞生长很快，状态明显好转，但好像红霉素不能完全根治支原体感染，停药后一段时间可以复发，热灭活可以试试，41度10个小时，可以杀死支原体，是一种比较简单的方法，对细胞损伤不大。
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
10楼2010-07-26 16:28:10
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普通回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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lstt09nk(金币+2):这个对我也有帮助 ~~嘿嘿 2010-07-25 20:27:18
染hoechst，如果看到除了细胞核之外有很多小小的荧光点，那么就是支原体啦~
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2楼2010-07-25 13:16:10
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ganggang6667

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-25 13:16:10:
染hoechst，如果看到除了细胞核之外有很多小小的荧光点，那么就是支原体啦~

谢谢您建议~~我们实验室也用过这种方法，有时效果不好！！用mycoAlert但价钱太贵！！
您还有什么好方法吗？？
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3楼2010-07-26 12:22:54
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lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂
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Originally posted by ganggang6667 at 2010-07-26 12:22:54:


谢谢您建议~~我们实验室也用过这种方法，有时效果不好！！用mycoAlert但价钱太贵！！
您还有什么好方法吗？？

可以考虑DAPI染色~~
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坚持能无数次改变人生的风景，因为只要路是对的，就不怕远~~~
4楼2010-07-26 14:00:00
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henkally

禁虫 (著名写手)
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看天(金币+2):鼓励交流 2010-07-26 15:26:55
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5楼2010-07-26 14:50:22
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ganggang6667

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lstt09nk at 2010-07-26 14:00:00:

可以考虑DAPI染色~~

谢谢您的建议，我还想问问您，DAPI能对环境中游离的DNA染色，并发出荧光嘛？怕培养中细胞破碎后游离的DNA分子影响结果。
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6楼2010-07-26 14:57:28
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ganggang6667

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by henkally at 2010-07-26 14:50:22:
还有个办法,速度很快,但需要MONEY.
做电镜,如果有支原体污染的话,能看到支原体的轮状结构的.其实这个方法很直接,说明问题.但是,但是,电镜挺贵的,我以前就600元(2小时),按时间收费的

呵呵，谢谢您了~~不过，这真是砸钱了，我们实验室可没这么好的装备。
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7楼2010-07-26 14:59:17
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henkally

禁虫 (著名写手)
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8楼2010-07-26 15:01:39
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lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂
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引用回帖:
Originally posted by ganggang6667 at 2010-07-26 14:57:28:


谢谢您的建议，我还想问问您，DAPI能对环境中游离的DNA染色，并发出荧光嘛？怕培养中细胞破碎后游离的DNA分子影响结果。

单纯的支原体污染的话，不会使得细胞破碎的
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坚持能无数次改变人生的风景，因为只要路是对的，就不怕远~~~
9楼2010-07-26 15:44:44
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