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xiaoweiwei

金虫 (正式写手)

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专业: 食品科学基础

[交流] 槟榔碱的提取和测定

槟榔－槟榔碱的测定－薄层扫描法1
范围
本方法采用薄层扫描法测定槟榔中槟榔碱的含量。
本方法适用于棕榈科植物槟榔（Areca catechu L.）的干燥成熟种子。
2 原理
供试品加氨水,用乙醚提取,吸出提取液，滤过，残渣用乙醚洗涤，合并乙醚液，常温下挥干，
用氯仿提取干浸膏，吸出，过滤，再用氯仿洗涤，合并氯仿提取液，定容，制成供试液，点样、
展开，用薄层扫描仪进行扫描，于波长λ= 214nm 测量槟榔碱的吸收度积分值，计算其含量。
3 试剂（除特殊注明外均为分析纯试剂）
3.1 氨水
3.2 甲醇
3.3 氯仿
3.4 硅胶GF254
4 仪器设备
4.1 仪器
4.1.1 双波长薄层扫描仪
4.1.2 CAMAG 铺板器
4.1.3 微量进样器
4.1.4 紫外检测器(UV-8 型)
4.2 材料
4.2.1 玻板
用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm 或20cm×20cm 的规格，要求光滑、平整，
洗净后不附水珠，晾干。
4.2.2 吸附剂
硅胶G，其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。
5 试样制备
5.1 对照品溶液的制备
精密称取氢溴酸槟榔碱标准品7.6mg，加95％乙醇，作为对照品溶液。
5.2 供试品溶液的制备
精密称取槟榔样品约2.5g，参照药典槟榔总碱的测定项下，先加氨水2mL，用30mL 乙醚浸
提30min，吸出提取液，滤过，残渣用乙醚洗涤3 次，每次5mL，合并乙醚液，常温下挥干，用
5mL 氯仿提取干浸膏，吸出，过滤，再用氯仿洗涤3 次，每次2mL，合并氯仿提取液，定容为
5mL，作为供试品溶液。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体
积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
6 操作步骤
6.1 薄层板制备
取硅胶G 加0.7％CMC-Na 溶液，按1:3.5 混匀，用CAMAG 铺板器铺板，l10℃活化40min。
6.2 点样
精密吸取供试品溶液与对照品溶液各5μL，交叉点于同一硅胶G 薄层板上，如用点样器点
样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距
离可视斑点扩散情况，以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。
6.3 展开
将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，以氯仿-甲醇-氨水(10:0.2:0.2)为展开剂，展开
至8～15cm 时，取出薄层板，晾干。
6.4 标准曲线的绘制
分别精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5μL，点样，展开，晾干,作双波长锯齿扫描，以对
照品浓度对斑点面积积分值绘制标准曲线，进行线性回归,求得回归方程。
6.5 含量测定
在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，选择反射方式，采用吸收法，进行扫
描，波长：λS = 214nm，根据样品与标准品扫描的面积值，用外标两点法计算含量。
7 结果计算
7.1 供试品浓度计算
将供试品（或其杂质）的斑点面积积分值代入对照品的线性回归方程y=a+bx 进行计算：
Cx = (Ax –a ) / b
7.2 供试品百分含量计算
Wx =T CxVx / W × 100%
式中：y = a+ bx ― 为对照品的线性回归方程；
y ― 为AR；
x ― 为CR；
a ― 为截距；
b ― 斜率；
Ax ― 为供试品（或其杂质）的峰面积或峰高；
AR ― 为对照品的峰面积或峰高；
CR ― 为对照品的浓度（mg/mL）；
Cx ― 为供试品（或其杂质）的浓度（mg/mL）；
Vx ― 为供试品体积（mL）；
T ― 为供试品稀释倍数；
W ―为供试品称样重量（g）；
Wx ―为供试品百分含量(%)。
8 精密度
用5μL 毛细管在同一薄层板上点6 个对照品溶液点，展开，扫描，计算结果，CV(％)小于
2.10。
9 参考文献
卢英翠,李逢春,郑青山. 薄层扫描法测定槟榔中槟榔碱的含量. 山东医药工业，2002，21(4)，

槟榔—总生物碱的测定—分光光度法
1 范围
本方法采用酸性染料比色法测定槟榔中总生物碱的含量。
本方法适用于棕榈科植物槟榔Areca catechu L.的成熟种子。
2 原理
供试品溶液置分液漏斗中，精密加入醋酸-醋酸钠缓冲液和溴甲酚绿溶液，摇匀，精密加入
氯仿萃取，振摇，静置，分取氯仿层，置预先放有无水硫酸钠的干燥容量瓶中，振摇，静置，
精密吸取上清液，精密加入氢氧化钾无水乙醇液，摇匀，于波长618nm 处测定吸收度，代入标
准曲线中计算其含量。
3 试剂（除特殊注明外均为分析纯试剂）
3.1 醋酸-醋酸钠缓冲溶液
3.2 浓氨水
3.3 0.01mol/L 硫酸
3.4 乙醚
3.5 溴甲酚绿
3.6 氯仿
3.7 0.01mol/L 氢氧化钾
4 仪器设备
4.1 UV-2l00 分光光度计
4.2 雷磁PH-25 酸度计
4.3 H66025T 超声清洗机器
5 试样制备
5.1 称取供试品
精密称取本品粉末(过二号筛-24 目) l g。
5.2 对照品溶液的制备
精密称取氢溴酸槟榔碱125mg 置50mL 容量瓶中，加pH5.0 醋酸-醋酸钠缓冲溶液溶解并
稀释至刻度，得对照品储备液。精密吸取1mL 对照品储备液置50mL 容量瓶中，加上述缓冲溶
液稀释至刻度，作为对照品溶液。
5.3 供试品溶液的制备
将供试品置带塞磨口锥形瓶中，精密加入浓氨水1mL 浸润2min，加乙醚30mL 超声振荡
20min，分取乙醚液，残渣加乙醚超声振荡3 次，每次10mL，各5min，合并乙醚液。低温蒸发
至约10mL，移置分液漏斗中，用0.01mol/L 硫酸溶液40mL，分4 次萃取，每次15、10、10、
5mL。萃取酸水液同置50mL 容量瓶中，用1mol/L 醋酸钠调至pH 值为5，摇匀，用PH5.0 醋
酸-醋酸钠缓冲液稀释至刻度。精密吸取此溶液1mL 置分液漏斗中，精密加入pH 5.0 醋酸-醋酸
钠缓冲液4mL 和溴甲酚绿溶液2mL，轻轻摇匀，精密加入氯仿5、2、2、1mL 4 次萃取，每次
振摇2min，静置30min，分取氯仿层，置预先放有无水硫酸钠0.2g 的干燥容量瓶中，振摇，静
置，精密吸取上清液5mL，精密加入0.01mol/L 的氢氧化钾无水乙醇液1mL，摇匀，作为供试
品溶液。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一，“精密量取”系指量取体
积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
6 操作步骤
6.1 标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液0.4、0.7、l.0、1.5、2.0、2.5mL，分别置分液漏斗中，按样品测定项
下操作，测定吸光度，以槟榔碱量对吸光度绘制标准曲线，得到回归方程。
6.2 供试品的测定
供试品于波长618nm 处测定吸收度。
7 结果计算
7.1 供试品进样量的计算
将供试品（或其杂质）的峰面积或峰高代入对照品的线性回归方程y=a+bx 进行计算：
Cx = (Ax –a ) / b
7.2 供试品百分含量计算
Wx =T Cx /W × 100%
式中：y = a+ bx ― 为对照品的线性回归方程；
y ― 为AR；
x ― 为CR；
a ― 为截距；
b ― 斜率；
Ax ― 为供试品（或其杂质）的峰面积或峰高；
AR ― 为对照品的峰面积或峰高；
CR ― 为对照品的进样量（mg）；
Cx ― 为供试品（或其杂质）的进样量（mg）；
T ― 为供试品稀释倍数；
W ―为供试品称样重量（g）；
Wx ―为供试品百分含量(%)。
8 精密度
取同一比色样品，连续测定8 次吸光度的RSD 小于0.123％。
9 参考文献
徐洁. 酸性染料比色法测定槟榔中总生物碱的含量. 海峡药学，2001，13(1)：30-31.

槟榔－槟榔碱的测定－薄层扫描法2
1 范围
本方法采用薄层扫描法测定槟榔中槟榔碱的含量。
本方法适用于棕榈科植物槟榔Areca catechu L.的干燥成熟种子。
2 原理
供试品加氨水,用乙醚提取,吸出提取液，滤过，残渣用乙醚洗涤3 次，合并乙醚液，常温下
挥干，用氯仿提取干浸膏，吸出，过滤，再用氯仿洗涤3 次，合并氯仿提取液，定容，制成供
试液，点样、展开，用薄层扫描仪进行扫描，于波长λ=214nm 测量槟榔碱的吸收度积分值，计
算其含量。
3 试剂（除特殊注明外均为分析纯试剂）
3.1 氨水
3.2 甲醇
3.3 氯仿
4 仪器设备
4.1 仪器
4.1.1 双波长薄层扫描仪
4.1.2 紫外检测器
4.1.3 点样器
5μL 点样毛细管(Drummond USA)
4.1.4 微量进样器
4.1.5 展开室
可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平底或双槽，盖子须密闭。
4.2 材料
4.2.1 玻板
用10cm×20cm、20cm×20cm 的规格，厚约0.3mm，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，
晾干。
4.2.2 吸附剂
硅胶G，其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。
5 试样制备
5.1 对照品溶液的制备
精密称取氢溴酸槟榔碱标准品7.6mg，95％乙醇定容为2mL，作为对照品储备液。
5.2 标准溶液的制备
精密量取对照品储备液50，100，200，400，800μL，95%乙醇分别定容为1mL，作为绘制
标准曲线的系列浓度标准溶液。
5.3 供试品溶液的制备
精密称取槟榔样品约2.5g，参考药典槟榔总碱的测定项下，先加氨水2mL 湿润2min，以
30mL 乙醚浸提30min，吸出乙醚提取液，滤至小烧杯中，残渣另用乙醚洗涤3 次，每次5mL，
合并乙醚液，常温下挥干。以氯仿5mL 提取干浸膏，吸出，过滤，再以氯仿洗涤3 次，每次2mL。
合并氯仿提取液，定容为5mL，作为供试品溶液。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体
积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
6 操作步骤
6.1 薄层板制备
吸附剂为硅胶GF254，加0.5％CMC-Na 薄层板(10cm×20cm 及20cm×20cm，厚约0.3mm)，
110℃活化30min。
6.2 点样
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5μL，分别交叉点于同一硅胶G 薄层板上，如用点样
器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点
间距离可视斑点扩散情况，以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。
6.3 展开
将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，以氯仿－甲醇－氨水(12：0.25：0.2)为展开剂，
展开至8～15cm 时，取出薄层板，晾干，以改良碘化铋钾显色。
6.4 标准曲线的绘制
精密量取上述标准溶液5μL 点于同一薄层板上, 上行展开约10cm, 溶剂挥干后, 置紫外检
测器下观察荧光, 确定斑点位置, 进行色谱扫描, 得到线性关系良好的标准曲线.。
6.5 含量测定
在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，选择反射方式，采用吸收法，用单
波长进行扫描，波长：λS = 214nm，测量供试品与对照品扫描面积值，用外标两点法计算。
7 结果计算
7.1 供试品浓度计算
将供试品（或其杂质）的峰面积或峰高代入对照品的线性回归方程y=a+bx 进行计算：
Cx = (Ax –a ) / b
7.2 供试品百分含量计算
Wx = TCxVx /W × 100%
式中：y = a+ bx ― 为对照品的线性回归方程；
y ― 为AR；
x ― 为CR；
a ― 为截距；
b ― 斜率；
Ax ― 为供试品（或其杂质）的峰面积或峰高；
AR ― 为对照品的峰面积或峰高；
CR ― 为对照品的浓度（mg/mL）；
Cx ― 为供试品（或其杂质）的浓度（mg/mL）；
Vx ―为供试品体积（mL）；
T ―为供试品稀释倍数；
W ―为供试品称样重量（g）；
Wx ―为供试品百分含量(%)。
8 精密度
用5μL 毛细管在同一薄层板上点6 个对照品溶液点，展开，扫描， CV(％)小于3.40。
9 参考文献
林励，许鸿华，邓沛森等. 槟榔中槟榔碱含量的薄层扫描测定. 中国中药杂志，1992，17
（8）：491-492.

槟榔---生物碱测定---中和滴定法
1 范围
本方法采用滴定法测定槟榔中生物碱（以槟榔碱计算）的含量。
本方法适用于棕榈科植物槟榔Areca catechu L.的干燥成熟种子。
2 原理
供试品用乙醚提取，再用硫酸滴定液萃取生物碱，使生物碱溶于酸液中，以
甲基红指示液为指示剂，用氢氧化钠滴定液滴定。终点后，读出氢氧化钠滴定液
使用量，生物碱的量以槟榔碱计算。
3 试剂（除特殊注明外均为分析纯试剂）
3.1 基准无水碳酸钠
3.2 滑石粉
3.3 乙醚
3.4 基准邻苯二甲酸氢钾
3.5 硫酸滴定液（0.01mol/L）
配制：量取6.0mL 硫酸缓缓注入适量水中，冷却至室温，加水稀释至
1000mL，摇匀，得0.1mol/L 硫酸滴定液。
再精取一定体积的0.1mol/L 硫酸滴定液并加入适量的水，将体积准确稀释
至10 倍,即得0.01mol/L 的硫酸滴定液。
0.1mol/L 硫酸滴定液的标定：取在270~300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠
约0.3g，精密称定，加水50mL 使溶解，加甲基红—溴甲酚绿混合指示液10 滴，
用本液滴定至溶液由绿色转变为紫红色时，煮沸2 分钟，冷却至室温，继续滴定
至溶液由绿色变为暗紫色。每1mL 硫酸滴定液（0.1mol/L）相当于10.60mg 的
无水碳酸钠。
3.6 氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）
配制：取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6mL，加新沸过的冷水使成1000mL。
得到0.1mol/L 氢氧化钠滴定液。
再精取一定体积的0.1mol/L 氢氧化钠滴定液，加新沸过的冷水适量，将体
积准确稀释至5 倍，即得0.02mol/L 氢氧化钠滴定液。
0.1mol/L 氢氧化钠滴定液的标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸
氢钾约0.6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解。加酚酞
指示液2 滴，用本液滴定；在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定
至溶液显粉红色。每1mL 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg 的邻苯
二甲酸氢钾。
3.7 甲基红指示液
取甲基红0.1g，加0.05mol/L 氢氧化钠溶液7.4mL 使溶解，再加水稀释至
200mL。
3.8 甲基红-溴甲酚绿混合指示液
取0.1%甲基红的乙醇溶液20mL，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30mL，摇匀制
成。
3.9 酚酞指示液
取酚酞1g，加乙醇100mL 使溶解。
3.10 氨试液
取浓氨溶液400mL，加水使成1000mL。
4 操作步骤
精密称取供试品粗粉（能全部通过二号筛，但混有能通过四号筛不超过
40%的粉末）（“烘干法”测定水分，不得过10.0%）约8g，置具塞锥形瓶中，加
乙醚80mL，振摇后加氨试液4mL，振摇10 分钟，加无水硫酸钠10g，振摇5
分钟，静置俟沉淀，分取乙醚液，置分液漏斗中，残渣用乙醚洗涤3 次，每次
10mL，合并醚液，加滑石粉0.5g，振摇3 分钟，加水2.5mL，振摇3 分钟，静
置，至上层醚液澄清时，分取醚液，水层用少量乙醚洗涤，合并醚液，低温蒸发
至约20mL，移置分液漏斗中，精密加入硫酸滴定液（0.01mol/L）20mL，振摇
提取，静置俟分层，分取醚层，醚层用水振摇洗涤3 次，每次5mL，合并洗液
与酸液，滤过，滤器用水洗涤，合并洗液与酸液，加甲基红指示液数滴，用氢氧
化钠滴定液（ 0.02mol/L）滴定。每1mL 硫酸滴定液（ 0.01mol/L）相当于3.104mg
的槟榔碱（C8H13NO2）。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取
体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
5 结果计算
5.1 硫酸滴定液浓度计算
式中： C1--硫酸滴定液浓度（mol/L）
W1--基准无水碳酸钠重量（g）
V1--基准无水碳酸钠所消耗的硫酸滴定液体积数（mL）
5.2 氢氧化钠滴定液浓度计算
式中： C2--氢氧化钠滴定液浓度（mol/L）
W2--基准邻苯二甲酸氢钾重量（g）
V2--基准邻苯二甲酸氢钾所消耗的氢氧化钠滴定液体积数（mL）
5.3 生物碱
槟榔碱含量
式中：C1— 硫酸滴定液浓度（mol/L）
C2— 氢氧化钠滴定液浓度（mol/L）
V3— 滴定供试品时所消耗的氢氧化钠滴定液体积数（mL）
W3--供试品重量（g）
注：供试品按干燥品计算，含醚溶性生物碱以槟榔碱（C8H13NO2）计，不得少于0.30%。
6 精密度
容量滴定法，平行测定5 次，其测定结果相对标准偏差应不大于1%。
7 参考文献
中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2000 年版，
一部，p299。

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