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nanobio8816

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】动物细胞G418筛选 已有2人参与

我用真核表达载体pEGFP-N1 质粒转动物细胞中,转染后加G418筛选想得到整合在染色体上稳定表达的细胞系,但是有一个老师提出问题说这个质粒载体本身含有真核复制起点,所以其在动物细胞中能正常复制,而且我的载体上没有转座序列,加药筛选得到只是转染成功含质粒的细胞,也不一定能得到整合到染色体上稳定表达的细胞系。

请问是这样吗?有没有随机整合的可能性,大家来讨论讨论。。
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lizziayun

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-15 10:53:26
有可能会被整合到染色体里头去,但是,几率很低,所以要加药筛选,然后单克隆化,鉴定

pEGFP这个质粒好啊,如果你们有流式分选,单克隆化就方便多了

如何流式分选
抛弃懒惰
3楼2015-04-01 16:22:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-15 12:57:13
有可能会被整合到染色体里头去,但是,几率很低,所以要加药筛选,然后单克隆化,鉴定

pEGFP这个质粒好啊,如果你们有流式分选,单克隆化就方便多了
2楼2010-07-15 10:53:26
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