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yxwb-234

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】请教化学的哥哥姐姐弟弟妹妹们 已有1人参与

我用福林-酚法测蛋白酶的酶活,方法都有现成的,但是我买回来的福林-酚试剂却分为福林试剂甲,福林试剂乙,而书上写的就是加入福林试剂多少毫升,怎么办啊,着急啊。请问化学的gg,mm们,是不是还有一种福林-酚试剂混合液啊,不分甲液乙液的那种?
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xueemma

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
zeng1986kai(金币+3): 谢谢应助! 2011-10-09 09:12:55
Folin-酚试剂使用说明书

1.Folin—酚试剂甲:
      溶液I: 2g无水碳酸钠溶于100ml 0.2mol/L 氢氧化钠中(已配置成5X),用时稀释5倍
溶液II: 0.5g五水硫酸铜溶于100ml 1%酒石酸钾钠(或酒石酸钠)溶液。
将稀释后的溶液I与溶液II,以50:1的比例混合,混合后即为Folin-酚试剂甲,此试剂只能用一天,过期失效。
2.Folin—酚试剂乙:
      原液浓度为2moL/L,使用前需稀释一倍,用多少稀释多少。使其最后浓度为1moL/L, 此为Folin—酚试剂乙应用液。Folin—酚试剂乙原液平时应密封贮存于4℃冰箱中避光保存。
3.操作方法:
1) 标准曲线的制作:
取14只试管分成两组,按下表顺序加入试剂,混匀,于室温℃放置10分钟。再加入0.5毫升试剂乙,立即摇匀,在室温放置30分钟,然后于500nm处比色。测定光密度值。取两组测定的平均值, 以蛋白质浓度为横座标,光密度值为纵座标,绘制标准曲线值为定量的依据。
试剂/管号        0        1        2        3        4        5        6
BSA/ml(250ug/ml)        0        0.1        0.2        0.4        0.6        0.8        1.0
蒸馏水/ml        1.0        0.9        0.8        0.6        0.4        0.2        0
试剂甲/ml        5        5        5        5        5        5        5
试剂乙/ml        0.5        0.5        0.5        0.5        0.5        0.5        0.5
2) 样品测定:
1、取1毫升样品溶液(约合20-250微克多肽或蛋白质)加入5毫升试剂甲混匀,于室温放置10分钟,
2、加0.5毫升试剂乙(Folin—酚);立即摇匀,于室温保温30分钟:然后于500nm处比色,以1毫升水代替样品作空白对照。测定后,可从标准曲线中查出未知样品的浓度。
      若用0.5厘米光程的比色杯进行比色,可按下面方法进行操作;取0.2毫升样品溶液(约含5—100微克多肽或蛋白质),加入1毫升试剂甲(可选用 0.3-0.5厘米直经的小试管)混匀,10分钟后,再加入0.1毫升试剂乙,立即混匀,30分钟后比色。一般来说,若多肽或蛋白质浓渡在2-25微克,测波长755nm,而25微克以上则采用500nm比色为宜。
3楼2011-05-18 16:07:39
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lcyingying

铜虫 (初入文坛)

应该是有混合液吧!
2楼2010-07-27 21:22:45
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