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yxwb-234

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助】请教化学的哥哥姐姐弟弟妹妹们已有1人参与

我用福林-酚法测蛋白酶的酶活，方法都有现成的，但是我买回来的福林-酚试剂却分为福林试剂甲，福林试剂乙，而书上写的就是加入福林试剂多少毫升，怎么办啊，着急啊。请问化学的gg,mm们，是不是还有一种福林-酚试剂混合液啊，不分甲液乙液的那种？

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1楼 2010-07-01 16:12:07

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xueemma

木虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
zeng1986kai(金币+3): 谢谢应助！ 2011-10-09 09:12:55

Folin-酚试剂使用说明书

1．Folin—酚试剂甲：
   溶液I: 2g无水碳酸钠溶于100ml 0.2mol/L 氢氧化钠中（已配置成5X）,用时稀释5倍
溶液II: 0.5g五水硫酸铜溶于100ml 1%酒石酸钾钠（或酒石酸钠）溶液。
将稀释后的溶液I与溶液II,以50：1的比例混合，混合后即为Folin-酚试剂甲，此试剂只能用一天，过期失效。
2．Folin—酚试剂乙：
   原液浓度为2moL/L，使用前需稀释一倍，用多少稀释多少。使其最后浓度为1moL/L，此为Folin—酚试剂乙应用液。Folin—酚试剂乙原液平时应密封贮存于4℃冰箱中避光保存。
3．操作方法：
1) 标准曲线的制作：
取14只试管分成两组，按下表顺序加入试剂，混匀，于室温℃放置10分钟。再加入0.5毫升试剂乙，立即摇匀，在室温放置30分钟，然后于500nm处比色。测定光密度值。取两组测定的平均值，以蛋白质浓度为横座标,光密度值为纵座标，绘制标准曲线值为定量的依据。
试剂/管号 0 1 2 3 4 5 6
BSA/ml(250ug/ml) 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水/ml 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0
试剂甲/ml 5 5 5 5 5 5 5
试剂乙/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
2) 样品测定：
1、取1毫升样品溶液（约合20-250微克多肽或蛋白质）加入5毫升试剂甲混匀，于室温放置10分钟，
2、加0.5毫升试剂乙(Folin—酚)；立即摇匀，于室温保温30分钟：然后于500nm处比色，以1毫升水代替样品作空白对照。测定后，可从标准曲线中查出未知样品的浓度。
   若用0.5厘米光程的比色杯进行比色，可按下面方法进行操作；取0.2毫升样品溶液（约含5—100微克多肽或蛋白质），加入1毫升试剂甲（可选用 0.3-0.5厘米直经的小试管）混匀，10分钟后，再加入0.1毫升试剂乙，立即混匀，30分钟后比色。一般来说，若多肽或蛋白质浓渡在2-25微克，测波长755nm，而25微克以上则采用500nm比色为宜。