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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】影响酶切的因素？
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20040359

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励新虫交流。 2010-06-30 21:37:13
我觉得呢 酶切还是很多因素的 选择的buffer最好是两个酶接近使用的buffer
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11楼2010-06-30 21:32:19
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zplipeng

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流 2010-07-01 16:39:59
可以在溶解DNA的溶液里加RNAse，影响酶切的因素有质粒纯度，质粒与酶的摩尔比，酶切温度，酶切时间，如果是双酶切还有共用buffer的选用，TAKRA的有些酶要加BSA和Trition
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
12楼2010-07-01 12:48:54
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
提质粒后跑电泳如果在<100bp的位置出现很亮的一团，应该就是RNA了，可以加入少量RNase室温放置几分钟进行降解。
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
13楼2010-07-01 15:58:16
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glidingwater

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
影响酶切的因素尚有蛋白，提取的质粒中若含有杂蛋白，可影响酶切效果（切不动或识别有误）。
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如果社会的黑暗侵蚀了学府，我该往何处？
14楼2010-07-02 07:47:37
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
RNA是没影响的
优化下你的酶切体系吧
双酶切的话要找到合适的buffer
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15楼2010-07-02 10:33:45
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
测下，质粒浓度，应该可以看出有没有RNA污染的吧，不行重提质粒，注意操作
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严于律己，宽以待人
16楼2010-07-02 10:37:11
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zhangzhifa
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk:交流贴请勿纯表~ 2010-07-07 17:09:21
17楼2010-07-05 11:11:58
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violet.zhou

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要是觉得有影响的话，做个胶回收不就没有问题了啊
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18楼2010-07-07 11:33:20
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

谢谢！

引用回帖:
Originally posted by 20040359 at 2010-06-30 21:32:19:
我觉得呢 酶切还是很多因素的 选择的buffer最好是两个酶接近使用的buffer

TAKARA商品目录上有一个双酶切反应时的通用缓冲液的使用表，我在那上边查找的。
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19楼2010-07-07 16:33:45
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

谢谢！

引用回帖:
Originally posted by zplipeng at 2010-07-01 12:48:54:
可以在溶解DNA的溶液里加RNAse，影响酶切的因素有质粒纯度，质粒与酶的摩尔比，酶切温度，酶切时间，如果是双酶切还有共用buffer的选用，TAKRA的有些酶要加BSA和Trition

我在酶切体系里家了少量的RNA酶，结果表明出去了部分的RNA。
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20楼2010-07-07 16:35:19
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