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DNA浓度的测定计算
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求助测定DNA浓度的方法 如果用紫外光谱法测得DNA溶液A260 A280处的吸光度，通过这两个吸光度值，通过什么公式怎么计算得到此时的DNA溶液的浓度呢？此外，紫外的空白是不是就是我所用来稀释DNA的水溶液就可以了？ 急，急，急…… 注：所用DNA为双链小麦DNA [ Last edited by zhouyan_629 on 2010-6-29 at 16:04 ] |
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shp011222
铁杆木虫 (著名写手)
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zhouyan_629(金币+5, 博学EPI+1): 2010-07-05 09:03:32
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用分光光度计法定量DNA 1.取2μl提取的质粒DNA，加入98μl蒸馏水对待测DNA样品做1:50(或更高倍数的稀释); 2.蒸馏水作为空白,在波长260nm、280nm处调节紫外分光光度计读数至零; 3.加入DNA稀释液，测定260nm 及280nm的吸收值。260nm 读数用于计算样品中核酸的浓度，OD260值为1相当于约50μg /ml双链DNA，33μg /ml单链。可根据在260nm以及在280nm的读数的比值（OD260/OD280）估计核酸的纯度。一般DNA的纯品，其比值为1.8，低于此值说明有蛋白质或其它杂质的污染。 4.DNA浓度或纯度的公式如下: dsDNA=50×(OD260) × 稀释倍数 以上浓度单位为μg /ml PS:若你用的是蒸馏水稀释，那就用蒸馏水做空白就行了。 |
2楼2010-06-29 18:05:32