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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因克隆前PCR产物都要纯化吗？
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qsx04152006

木虫 (知名作家)
★
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最好是纯化
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11楼2010-06-29 12:18:57
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xiaoru2010

引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-06-29 10:38:54:
如果直接是PCR产物测序肯定是需要纯化的，否则结果不仅仅是重叠峰的问题了。
如果是克隆的话，一般都是建议纯化的。纯化后可以将PCR产物里面的缓冲体系改变，增加做克隆的成功率等。但是如果有些人比较有经验的看 ...

请问一下凝胶回收就等于是纯化ma？不用再用专门的纯化试剂盒再处理一遍了吧？
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12楼2010-07-02 16:04:07
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对于有非特异性的条带来说胶回收就是纯化和浓缩了DNA。如果用专门的试剂盒纯化是根据你后续试验来确定的，有些试验需要DNA的浓度和纯度都比较高，用专门的纯化KIT可以达到这个效果。
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52187644
13楼2010-07-02 16:37:54
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
纯化后 可以去除PCR反应buffer中的残留液
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14楼2010-07-06 19:24:45
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-07 08:14:03
片段最好用凝胶回收试剂盒进行纯化，因为PCR片段中的小片段连接效率是更高的，会严重影响你的目的条带的连接效率
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
15楼2010-07-06 23:54:25
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天外飞仙→顺

铜虫 (小有名气)
不需要纯化，，，PCR没多大影响
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我无法改变自己的出生，但我可以决定自己的命运：命中注定我是一个王者，我必须拿出王者的风范！！！
16楼2010-07-06 23:59:39
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