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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR扩增模板精确定量:两个拷贝or三个拷贝的试验方法
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wdy0330 at 2010-06-22 09:58:20:



能麻烦您说具体点吗？
同样的核苷酸片段在电泳时是处在同一位置的，每种片段是仅对应一条带的，那存在多拷贝时还会出现多条条带吗？

[ Last edited by wdy0330 on 2010-6-22 at 10:10 ]

其实想一下原理，都不难想到如何用southern确定拷贝数
把gDNA酶切，转印，杂交，有几条带就是几个拷贝
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11楼2010-06-22 10:39:47
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎回来多多交流~~ 2010-06-22 18:36:03
引用回帖:
Originally posted by wdy0330 at 2010-06-22 09:58:20:



能麻烦您说具体点吗？
同样的核苷酸片段在电泳时是处在同一位置的，每种片段是仅对应一条带的，那存在多拷贝时还会出现多条条带吗？

[ Last edited by wdy0330 on 2010-6-22 at 10:10 ]

选择目的片段内部不含有切点的酶，这样酶切片段的大小就取决于目的基因所处的位置（也就是目的基因两侧的序列里是否有切点，在什么位置有切点），而不取决于目的基因本身的序列。

理论上讲，几个拷贝两侧的序列不会完全相同，切出来的片段大小也就不会相同，杂交出来的条带大小也就不一样。跟目的基因本身的性质无关。
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12楼2010-06-22 18:15:46
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wdy0330

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-22 18:15:46:


选择目的片段内部不含有切点的酶，这样酶切片段的大小就取决于目的基因所处的位置（也就是目的基因两侧的序列里是否有切点，在什么位置有切点），而不取决于目的基因本身的序列。

理论上讲，几个拷贝两侧的 ...

说的有道理，能明白Southern杂交确定拷贝数的原理了！
但对拷贝数这个概念又有点模糊了
除性基因外，正常基因在人类基因组中是否均存在2个拷贝？
假如一个基因在人类基因组中均存在3个拷贝，该如何解释？

[ Last edited by wdy0330 on 2010-6-23 at 17:32 ]
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13楼2010-06-23 17:29:32
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