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wdy0330

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】PCR扩增模板精确定量:两个拷贝or三个拷贝的试验方法已有5人参与

各位高手，在荧光定量PCR中，高的灵敏性甚至可以检测到一个拷贝的模板，但现在本人想采用一种试验方法去区分模板中到底是2个还是3个拷贝，不知各位有什么方法？麻烦赐教！

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1楼 2010-06-11 15:10:51

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ben1147

木虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎回来多多交流~~ 2010-06-22 18:36:03

引用回帖:

Originally posted by wdy0330 at 2010-06-22 09:58:20:

能麻烦您说具体点吗？
同样的核苷酸片段在电泳时是处在同一位置的，每种片段是仅对应一条带的，那存在多拷贝时还会出现多条条带吗？

[ Last edited by wdy0330 on 2010-6-22 at 10:10 ]

选择目的片段内部不含有切点的酶，这样酶切片段的大小就取决于目的基因所处的位置（也就是目的基因两侧的序列里是否有切点，在什么位置有切点），而不取决于目的基因本身的序列。

理论上讲，几个拷贝两侧的序列不会完全相同，切出来的片段大小也就不会相同，杂交出来的条带大小也就不一样。跟目的基因本身的性质无关。

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12楼2010-06-22 18:15:46

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love_st

金虫 (著名写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):欢迎交流！ 2010-06-11 18:30:19

这么少copy的，我想即使灵敏度如real time PCR，也无法准确定量，毕竟在定量上还是以数量级的，在临床上，一些病毒的检测下限是1000个copy，也就是说低于这个值没有意义，而高于这个值的话才会有意义，所以说，这样很难，那么小的copy，怎么保证每次加样的一致性，保证你能够加样时候一定把那三个copy取到？

[ Last edited by love_st on 2010-6-11 at 17:17 ]

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2楼2010-06-11 17:15:32

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