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wdy0330

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PCR扩增模板精确定量:两个拷贝or三个拷贝的试验方法 已有5人参与

各位高手,在荧光定量PCR中,高的灵敏性甚至可以检测到一个拷贝的模板,但现在本人想采用一种试验方法去区分模板中到底是2个还是3个拷贝,不知各位有什么方法?麻烦赐教!
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎回来多多交流~~ 2010-06-22 18:36:03
引用回帖:
Originally posted by wdy0330 at 2010-06-22 09:58:20:



能麻烦您说具体点吗?
同样的核苷酸片段在电泳时是处在同一位置的,每种片段是仅对应一条带的,那存在多拷贝时还会出现多条条带吗?

[ Last edited by wdy0330 on 2010-6-22 at 10:10 ]

选择目的片段内部不含有切点的酶,这样酶切片段的大小就取决于目的基因所处的位置(也就是目的基因两侧的序列里是否有切点,在什么位置有切点),而不取决于目的基因本身的序列。

理论上讲,几个拷贝两侧的序列不会完全相同,切出来的片段大小也就不会相同,杂交出来的条带大小也就不一样。跟目的基因本身的性质无关。
12楼2010-06-22 18:15:46
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love_st

金虫 (著名写手)


★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):欢迎交流! 2010-06-11 18:30:19
这么少copy的,我想即使灵敏度如real time PCR,也无法准确定量,毕竟在定量上还是以数量级的,在临床上,一些病毒的检测下限是1000个copy,也就是说低于这个值没有意义,而高于这个值的话才会有意义,所以说,这样很难,那么小的copy,怎么保证每次加样的一致性,保证你能够加样时候一定把那三个copy取到?

[ Last edited by love_st on 2010-6-11 at 17:17 ]
2楼2010-06-11 17:15:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

你做Southern好过……
3楼2010-06-11 18:57:42
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ben1147

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
确定拷贝数还是Southern吧

好做一点,还容易出结果。。。。。。
4楼2010-06-11 19:37:04
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