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【分享】实验室常用溶液的配制
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实验室常用溶液的配制 1．30%丙烯酰胺溶液 【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。 【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。 2．40%丙烯酰胺 【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。 【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。 3．放线菌素D溶液 【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。 【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。 药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。 4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液 【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃ 5．10mol/L乙酸酰溶液 【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。 6．10%过硫酸铵溶液 【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。 7．BCIP溶液 【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃ 8．2×BES缓冲盐溶液 【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节 该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。 9．1mol/L CaCl2溶液 【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2?6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。 【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。 10．2.5mol/L CaCl2溶液 【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2?6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。 11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液 【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。 【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。 12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液 【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。 13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液 【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na?2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节 溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。 【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。 14．溴化乙锭（10mg/ml溶液） 【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。 【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。 15．2×HEPES缓冲盐溶液 【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节 pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。 16．IPTG溶液 【配制方法】IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。 17．1mol/L乙酸镁溶液 【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。 18．1mol/L MgCl2溶液 【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。 【注意】MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。 19．β-巯基乙醇（BME）溶液 【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。 【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。 20．NBT溶液 【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。 21．酚/氯仿溶液 【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris?HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。 【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液 【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。 【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节 为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液 【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节 溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。 24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液 【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节 pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。 25．乙酸钾溶液（用于碱裂解） 【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。 26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液 【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pH值至5.2或用稀乙酸调节 pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。 27．5mol/L NaCl溶液 【配制方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。 28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液 【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节 溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。 【注意】SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。 29．20×SSC溶液 【配制方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节 pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。 30．20×SSPE溶液 【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4?H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节 pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。 31．100%三氯乙酸溶液 【配制方法】在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。 32．1mol/L Tris溶液 【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节 pH值至所需值。应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。 【注意】如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。 尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。 33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris） 【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。 34．X-gal溶液 【配制方法】X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。 配制： 乙二胺四乙酸二钠盐滴定液(0.1mol/L) 称取乙二胺四乙酸二钠盐40g，加热溶于1000ml水中，冷却，摇匀。 乙二胺四乙酸二钠盐滴定液(0.05mol/L) 称取乙二胺四乙酸二钠盐20g，加热溶于1000ml水中，冷却，摇匀。 乙二胺四乙酸二钠盐滴定液(0.02mol/L) 称取乙二胺四乙酸二钠盐8g，加热溶于1000ml水中，冷却，摇匀。标定： 标定： 0.1mol/L乙二胺四乙酸二钠盐溶液，取于约800℃灼烧至恒重的基准氧化锌0.25g±0.0001g，用少量水湿润，加2ml稀盐酸20%使其溶解，加水100ml，用10%氨水调至PH=7～8，加10ml氨—氯化铵（pH=10）及铬黑T指示剂，用配制好的乙二胺四乙酸二钠滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液由紫色变为纯蓝色。同时做空白。 C（EDTA）——乙二胺四乙酸二钠盐标准溶液量浓度 mol/L V1——乙二胺四乙酸二钠盐标准溶液用量 ml V2——乙二胺四乙酸二钠盐标准溶液用量 ml 0.08138——与1.00ml乙二胺四乙酸二钠盐标准溶液1.000mol/L相当的以克表示的氧化锌的质量 1.几种常用溶液浓度的表示法 （1）质量百分比浓度：用溶质的质量占全部溶液质量的百分比来表示的浓度。简称百分浓度。 （2）体积百分比浓度：用溶质的质量占溶剂体积的百分比来表示的浓度。在工农业生产中常用这种浓度。 （3）体积比浓度：液体试剂相互混和或液体试剂用水稀释时常用此法。 例如，1∶3酒精溶液指的是1体积的酒精和3体积的蒸馏水混和而成的酒精水溶液，1∶3中的前一个数字指的是溶质的体积数，后一个数字指的是溶剂的体积数。 （4）物质的量浓度：用1升溶液里含有溶质的量来表示的溶液浓度。目前习惯称摩尔浓度，用M表示。 （5）当量浓度：用每升溶液里所含溶质的克当量数表示的浓度。通常用N表示。 2.常用酸碱溶液的配制 表4-12常用酸碱溶液的配制 3.常用盐溶液的配制 表4-13常用盐溶液的配制 续表 常用溶液的配制 1．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液 【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na?2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节 溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。 【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。 0. 1mol/l EDTA(pH8.0)溶液 【配制方法】在800ml水中加入37.224g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na?2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用2当量NaOH调节 溶液的pH值至8.0然后定容至1L。 使用时稀释一百倍变成1mMol/l EDTA工作液。PH值调至8 2．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液 【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节 溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。 3．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris） 【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。 Tris缓冲盐溶液（TBS）（50mmol/l Tris PH7.6） Tris缓冲盐溶液（TBS）（50mmol/l Tris） 【配制方法】称取Tris（三羟甲基氨基甲烷）6.057g，加少许双蒸水溶解后加1HCL42ml,Nacl 8.5g,最后加双蒸水至1000ml,用1N HCL或NAOH调至7.6,充分摇匀,4℃保存 4当量当量表示元素或化合物相互作用时的重量比的数值 1mol/L的H2SO4,如果换成当量浓度就应该是2N H2SO4，大概的意思就是1mol的H2SO4会有2mol的氢离子，类似的1mol/L的HCL就是1N，1mol/L的NAOH就是1N，1mol/L的CA(OH)2就是2N,这是酸碱的。如果是氧化物或是还原物就看能得失的电子数，比如说1mol/L的K2Cr2O7的当量浓度就应该是6N,1mol/L的KMnO4的当量浓度是5N。如果是盐类，就看能与酸或碱结合所要的H+或OH-数量，比如说NA2CO3的就是2，NAHCO3是1 1当量HCL配制：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。 1当量NaOH配制：称取NaOH 4g 配成100ml溶液。 1当量硫酸溶液：量取分析纯硫酸（比重1.83）28毫升，慢慢注入 500 毫升水中，冷却后稀释到1升。 0.1当量硫酸溶液：量取分析纯硫酸2.8毫升，溶解于500毫升水中，冷却后稀释到1升。 配制培养基有两种方法可以选择，一是购买培养基中所有化学药品，按照需要自己配制；二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂，如MS、B5等。 自己配制可以节约费用，但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题，给实验带来麻烦。就目前国内的情况看，大部分还是自己配制。为了方便起见，现以MS培养基为例介绍配置培养基的主要过程。 1、配制几种母液 （1）配制MS大量元素母液 一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。 分别称取 NH4NO3 165g KH2PO4 17g KNO3 190g CaCl2•2H2O 44g MgSO4•7H2O 37g 各自配成1L的母液。倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 （2）配制MS微量元素母液 一般将微量元素配制成100倍母液。 依次称取 KI 0.083g Na2MoO4•2H2O 0.025g H3BO3 0.62g CuSO4•5H2O 0.0025g MnSO4•H2O 1.69g CoCl2•6H2O 0.0025g ZnSO4•7H2O 0.86g 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 CuSO4•5H2O和CoCl2•6H2O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。 分别称取 CuSO4•5H2O 0.05g CoCl2•6H2O 0.05g 各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。 （3）配制MS有机母液 一般配制成100倍MS有机母液。 依次称取 肌醇 10g 盐酸硫胺素（VB1） 0.01g 烟酸 0.05g 甘氨酸 0.2g 盐酸吡哆醇（VB6） 0.05g 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 （4）配制MS铁盐母液 一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取 EDTA二钠 3.73g FeSO4•7H2O 2.78g 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐母液，共8种母液。 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。一般取100mg配成100ml母液。 2、配制培养基 以配置1L MS培养基为例，按顺序进行如下操作： （1）先在烧杯中放入一些蒸馏水。 （2）分别取上面八种母液10ml倒入。 （3）一般称取30g蔗糖倒入，搅拌溶解。 （4）加蒸馏水用量筒定溶至1L。 （5）按设计好的方案添加各种激素，由于激素的用量很小，而且激素对组培植物的生长至关重要。所以有条件的话最好用微量可调移液器吸取，减少误差。 （6）用精密试纸或酸度计调整PH至5.7-5.8。（有条件的话使用酸度计，比较精确） 可配1当量的HCL和1当量的NaOH用来调溶液PH值。 1当量HCL配制：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。 1当量NaOH配制：称取NaOH 4g 配成100ml溶液。 （7）称取5g左右琼脂粉（质量好的琼脂粉),倒入上面配好的溶液中，放在电炉上加热至沸腾，直到琼脂粉熔化。 （8）稍微冷却后，分装入培养容器中。无盖的培养容器要用封口膜或牛皮纸封口，用橡皮筋或绳子扎紧。 （9）放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右。 （10）灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却凝固 |
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NiLiChun198819楼
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小小竹叶33楼
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