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icytide

铁虫 (初入文坛)

回答前面兄弟的疑问,我是做了单细胞的扫描投射电镜,在细胞里的EDX没有Ga的信号。

是否可以请cnlincs加以详述?如何把一个细菌变成感受态呢?BTW,我想送你金币感谢你的建议,可是系统说我没有权限。
引用回帖:
Originally posted by cnlics at 2010-05-28 13:03:37:
微生物有化学趋向性,还有抗渗机制,因此直接泡化学溶液里效果有限。

就细菌来说,把它处理成感受态,细胞壁上形成了透过小孔,或许可以增加被动渗透的效果。

但这样处理使得问题更加复杂了。

11楼2010-05-28 14:52:37
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icytide

铁虫 (初入文坛)

你的回复让我忍不住笑出声来。
粗犷,恩,这很幽默的概括了我的实验风格。
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-05-28 08:13:13:
这个实验设计的 好像有点粗犷

12楼2010-05-28 14:58:30
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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
生物膜都是半透性的,而且都带有离子泵,你这种很不常见的离子如果细菌不怎么用,当然不可能进去,除非细胞死了,逝去了半透性

一己之见
13楼2010-05-29 09:33:53
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jzhe961

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 甄伟 at 2010-05-28 09:49:49:
大肠杆菌是没有细胞壁的

大肠杆菌怎能没有细胞壁?如果吸收困难可考虑,可考虑选用其它的盐离子,就像补钙一样,选用葡萄糖酸钙。细菌在对伴随阴离子吸收时可增加对目标离子的吸水。
14楼2010-05-29 10:04:18
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cnlics

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
大肠杆菌是有细胞壁的,只有在特殊情况下可以认为没有细胞壁或者细胞壁不完整,比如形成L型菌的情形如临床上长期使用抗生素造成的慢性感染等等。

使细菌进入感受态很容易,大多分子生物学操作手册上会给出很多种不同的方法。感受态这个概念最初的来源是,某人发现将细菌泡在NaCl溶液中,外源的DNA较容易进入细菌内部,后来探索了使用其他溶液如CaCl2,MgSO4,MnSO4等等化学试剂诱导方法以及电击转化这一物理方法。这些方法如何使外源DNA进入细胞?据推测,这些方法在细胞壁上形成一种孔状复合物,使得外源DNA容易进入细胞内部,处于这样状态的细胞就是感受态细胞。我想,化学试剂也更容易进入感受态的细胞。

通过化学试剂处理的细菌,本身就是不同离子渗透的过程,再评价目的化学试剂的作用效果,显然很困难。

电击转化的方法,推测在电流作用下,在细胞壁上形成了微孔。这种方法适用于细菌,实际上也是转化酵母(真菌)的最常用方法。电击转化方法使用的离子少得多,个人以为比较适合评估其他化学试剂得作用效果,但电击方法一来需要电转化仪,二来这种方法会大量杀死细胞。使用电转化,关键要注意电击的电压和电击的时间。

补充一句,转化酵母还可以使用LiCl方法,这种方法要求先用蜗牛酶消化细胞壁。整个过程比较繁琐,如果不注意操作,还容易被霉菌污染。

[ Last edited by cnlics on 2010-5-29 at 10:55 ]
15楼2010-05-29 10:41:23
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icytide

铁虫 (初入文坛)

谢谢你的详细解说,非常感谢!我还有个问题,那就是感受态细胞是针对导入DNA分子而设计的,请问,它也可以用于导入离子吗?有类似的文献吗?
16楼2010-06-01 07:58:21
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