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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何把某种化学物质导入微生物细胞内部
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icytide

铁虫 (初入文坛)
回答前面兄弟的疑问，我是做了单细胞的扫描投射电镜，在细胞里的EDX没有Ga的信号。

是否可以请cnlincs加以详述？如何把一个细菌变成感受态呢？BTW，我想送你金币感谢你的建议，可是系统说我没有权限。
引用回帖:
Originally posted by cnlics at 2010-05-28 13:03:37:
微生物有化学趋向性，还有抗渗机制，因此直接泡化学溶液里效果有限。

就细菌来说，把它处理成感受态，细胞壁上形成了透过小孔，或许可以增加被动渗透的效果。

但这样处理使得问题更加复杂了。

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11楼2010-05-28 14:52:37
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icytide

铁虫 (初入文坛)
你的回复让我忍不住笑出声来。
粗犷，恩，这很幽默的概括了我的实验风格。
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-05-28 08:13:13:
这个实验设计的 好像有点粗犷

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12楼2010-05-28 14:58:30
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silicare

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生物膜都是半透性的，而且都带有离子泵，你这种很不常见的离子如果细菌不怎么用，当然不可能进去，除非细胞死了，逝去了半透性

一己之见
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13楼2010-05-29 09:33:53
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jzhe961

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by 甄伟 at 2010-05-28 09:49:49:
大肠杆菌是没有细胞壁的

大肠杆菌怎能没有细胞壁？如果吸收困难可考虑，可考虑选用其它的盐离子，就像补钙一样，选用葡萄糖酸钙。细菌在对伴随阴离子吸收时可增加对目标离子的吸水。
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14楼2010-05-29 10:04:18
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cnlics

木虫 (小有名气)
★
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大肠杆菌是有细胞壁的，只有在特殊情况下可以认为没有细胞壁或者细胞壁不完整，比如形成L型菌的情形如临床上长期使用抗生素造成的慢性感染等等。

使细菌进入感受态很容易，大多分子生物学操作手册上会给出很多种不同的方法。感受态这个概念最初的来源是，某人发现将细菌泡在NaCl溶液中，外源的DNA较容易进入细菌内部，后来探索了使用其他溶液如CaCl2，MgSO4，MnSO4等等化学试剂诱导方法以及电击转化这一物理方法。这些方法如何使外源DNA进入细胞？据推测，这些方法在细胞壁上形成一种孔状复合物，使得外源DNA容易进入细胞内部，处于这样状态的细胞就是感受态细胞。我想，化学试剂也更容易进入感受态的细胞。

通过化学试剂处理的细菌，本身就是不同离子渗透的过程，再评价目的化学试剂的作用效果，显然很困难。

电击转化的方法，推测在电流作用下，在细胞壁上形成了微孔。这种方法适用于细菌，实际上也是转化酵母（真菌）的最常用方法。电击转化方法使用的离子少得多，个人以为比较适合评估其他化学试剂得作用效果，但电击方法一来需要电转化仪，二来这种方法会大量杀死细胞。使用电转化，关键要注意电击的电压和电击的时间。

补充一句，转化酵母还可以使用LiCl方法，这种方法要求先用蜗牛酶消化细胞壁。整个过程比较繁琐，如果不注意操作，还容易被霉菌污染。

[ Last edited by cnlics on 2010-5-29 at 10:55 ]
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15楼2010-05-29 10:41:23
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icytide

铁虫 (初入文坛)
谢谢你的详细解说，非常感谢！我还有个问题，那就是感受态细胞是针对导入DNA分子而设计的，请问，它也可以用于导入离子吗？有类似的文献吗？
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16楼2010-06-01 07:58:21
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