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【求助/交流】如何把某种化学物质导入微生物细胞内部已有9人参与
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我想把镓离子尽量多的导入微生物的内部，比如E coli和Blue green algae的内部来看其对细胞的毒性。我试着在培养液里加了很多离子，但是发现细胞壁能抵挡离子的渗入。即使细胞都死了，还是没有什么镓离子进入细胞内部了。 请问对微米级别的细胞，有什么办法可以做到这点呢？谢谢。 |
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cnlics
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9楼2010-05-28 13:03:37
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大肠杆菌是有细胞壁的，只有在特殊情况下可以认为没有细胞壁或者细胞壁不完整，比如形成L型菌的情形如临床上长期使用抗生素造成的慢性感染等等。 使细菌进入感受态很容易，大多分子生物学操作手册上会给出很多种不同的方法。感受态这个概念最初的来源是，某人发现将细菌泡在NaCl溶液中，外源的DNA较容易进入细菌内部，后来探索了使用其他溶液如CaCl2，MgSO4，MnSO4等等化学试剂诱导方法以及电击转化这一物理方法。这些方法如何使外源DNA进入细胞？据推测，这些方法在细胞壁上形成一种孔状复合物，使得外源DNA容易进入细胞内部，处于这样状态的细胞就是感受态细胞。我想，化学试剂也更容易进入感受态的细胞。 通过化学试剂处理的细菌，本身就是不同离子渗透的过程，再评价目的化学试剂的作用效果，显然很困难。 电击转化的方法，推测在电流作用下，在细胞壁上形成了微孔。这种方法适用于细菌，实际上也是转化酵母（真菌）的最常用方法。电击转化方法使用的离子少得多，个人以为比较适合评估其他化学试剂得作用效果，但电击方法一来需要电转化仪，二来这种方法会大量杀死细胞。使用电转化，关键要注意电击的电压和电击的时间。 补充一句，转化酵母还可以使用LiCl方法，这种方法要求先用蜗牛酶消化细胞壁。整个过程比较繁琐，如果不注意操作，还容易被霉菌污染。 [ Last edited by cnlics on 2010-5-29 at 10:55 ] |
15楼2010-05-29 10:41:23