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lovelyzxj

新虫 (初入文坛)

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Originally posted by 小白兄 at 2010-05-17 23:28:08:
一种是因为酶切位点甲基化了。还有就是你是单切还是双切?双切的话两个酶切位点靠的太近也会导致一个酶切不开的。

双切、单切都做了,而且两个酶切位点之间连有外源片段。
11楼2010-05-18 15:13:47
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小白兄

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎回帖交流~~ 2010-05-18 18:15:18
引用回帖:
Originally posted by lovelyzxj at 2010-05-18 15:13:47:

双切、单切都做了,而且两个酶切位点之间连有外源片段。

你双切下的片段大小是多少?能通过跑胶与切下的载体分开吗?
我建议,分别单切XhoI和EcoRI,单切产物与质粒同时跑电泳,看看到底哪个酶切不开。
时光如流水,匆匆而过。
12楼2010-05-18 16:51:15
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xiquan1118

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
现在我也在用EcoR1和Xho1做重组质粒,跟你的问题很像,我查到Xho1的酶切效率很低,致使载体双酶切、连接后很容易形成自连, 现在筛选的菌株都是自连的。
我走的很慢,但我从不后退
13楼2014-03-25 17:09:35
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chenziping

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by xiquan1118 at 2014-03-25 17:09:35
现在我也在用EcoR1和Xho1做重组质粒,跟你的问题很像,我查到Xho1的酶切效率很低,致使载体双酶切、连接后很容易形成自连, 现在筛选的菌株都是自连的。

后来怎么解决的呢
14楼2014-10-03 00:05:22
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