应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Xhol 酶切不能切开
142/2返回列表上一页12
查看: 3004  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lovelyzxj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 小白兄 at 2010-05-17 23:28:08:
一种是因为酶切位点甲基化了。还有就是你是单切还是双切？双切的话两个酶切位点靠的太近也会导致一个酶切不开的。

双切、单切都做了，而且两个酶切位点之间连有外源片段。
赞一下 回复此楼
11楼2010-05-18 15:13:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白兄

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎回帖交流~~ 2010-05-18 18:15:18
引用回帖:
Originally posted by lovelyzxj at 2010-05-18 15:13:47:

双切、单切都做了，而且两个酶切位点之间连有外源片段。

你双切下的片段大小是多少？能通过跑胶与切下的载体分开吗？
我建议，分别单切XhoI和EcoRI，单切产物与质粒同时跑电泳，看看到底哪个酶切不开。
赞一下(2人) 回复此楼
时光如流水，匆匆而过。
12楼2010-05-18 16:51:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiquan1118

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
现在我也在用EcoR1和Xho1做重组质粒，跟你的问题很像，我查到Xho1的酶切效率很低，致使载体双酶切、连接后很容易形成自连， 现在筛选的菌株都是自连的。
赞一下 回复此楼
我走的很慢，但我从不后退
13楼2014-03-25 17:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenziping

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by xiquan1118 at 2014-03-25 17:09:35
现在我也在用EcoR1和Xho1做重组质粒，跟你的问题很像，我查到Xho1的酶切效率很低，致使载体双酶切、连接后很容易形成自连， 现在筛选的菌株都是自连的。

后来怎么解决的呢
赞一下 回复此楼
14楼2014-10-03 00:05:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lovelyzxj 的主题更新
142/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭