【求助/交流】蓝白斑筛选什么也不长 - 分子生物 - 综合其他

版块导航: 正在加载中...

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

返回列表

plantaqp

金虫 (正式写手)

应助: 14 (小学生)
贵宾: 0.012
金币: 738.3
散金: 774
红花: 9
帖子: 741
在线: 421.5小时
虫号: 293863
注册: 2006-11-05
专业: 植物生理与生化

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

引用回帖:

Originally posted by xiaoru2010 at 2010-05-14 07:28:15:

谢谢，请问一般连接多长时间呢？

时间长短有的说明书说几分钟就够了，但是从来没试过这么短时间的，我一般有的过夜有时候1个到几个小时，看自己时间的，有时间就让他多练一会。我如果连接时间比较短，我一般是取一半来转化，另一半过夜连。根据我的经验问题一般不是出在这里。
我觉得目的片段的质和量很重要，目的片段多多益善，而不是所谓的3：1. 当然目的片段质量要高，我都是胶回收。因为如果目的片段不纯比如含有影响酶活性的东西（试剂盒质量很关键，PCR产物直接连接的话，PCR体系中成分可能有干扰），连接必然受影响。

赞一下(1人)

回复此楼

11楼2010-05-14 14:38:56

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xiaoru2010

应助: (幼儿园)
在线:
虫号: 994353

引用回帖:

Originally posted by plantaqp at 2010-05-14 14:38:56:

时间长短有的说明书说几分钟就够了，但是从来没试过这么短时间的，我一般有的过夜有时候1个到几个小时，看自己时间的，有时间就让他多练一会。我如果连接时间比较短，我一般是取一半来转化，另一半过夜连。 ...

受益匪浅呀！多谢仁兄！确实没有回收好，惭愧惭愧

赞一下

回复此楼

12楼2010-05-14 15:39:05

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)

MolEPI: 2
应助: 7 (幼儿园)
金币: 644.8
帖子: 407
在线: 47.3小时
虫号: 296900
注册: 2006-11-18
专业: 动物遗传学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

不长斑是结果，可是导致这个结果的可能性太多了。连接转化做没做好，感受态效率是否高，培养基是否合适，抗生素是不是加多了·······每一步出问题了都会不长菌的。

赞一下(1人)

回复此楼

13楼2010-05-14 16:23:58

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1167.2
散金: 789
红花: 4
帖子: 508
在线: 63.2小时
虫号: 695679
注册: 2009-02-03
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

确定一下抗生素是否加错了，再就是浓度是否正确。
其次，检查一下感受态细胞，最好从比较有名气的公司订购，或者以其公司的菌种自己制作感受态，我一直都是自己做感受态DH5a,转化效率也是蛮高的。注意做好后要先进行验证，阴性、阳性对照，计算一下转化效率等。
如果都没有问题，可能就是连接出现问题了，应该逐项仔细检查。我也有连接转化一个不长的时候，很郁闷。连接转化时也出现阳性对照长得很好，但是我的样品要么不长，要么长得很慢，与阳性不同步。呵呵，不过能找到你想要的就可以了~~

祝顺利噢~~~

赞一下(1人)

回复此楼

我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！