应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蓝白斑筛选什么也不长
172/2返回列表上一页12
查看: 2775  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

plantaqp

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xiaoru2010 at 2010-05-14 07:28:15:

谢谢，请问一般连接多长时间呢？

时间长短有的说明书 说几分钟就够了，但是从来没试过这么短时间的，我一般有的过夜有时候1个到几个小时，看自己时间的，有时间就让他多练一会。 我如果连接时间比较短，我一般是取一半来转化，另一半过夜连。根据我的经验问题一般不是出在这里。
   我觉得目的片段的质和量很重要，目的片段多多益善，而不是所谓的3：1. 当然目的片段质量要高，我都是胶回收。因为如果目的片段不纯比如含有影响酶活性的东西（试剂盒质量很关键，PCR产物直接连接的话，PCR体系中成分可能有干扰），连接必然受影响。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2010-05-14 14:38:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoru2010

引用回帖:
Originally posted by plantaqp at 2010-05-14 14:38:56:


时间长短有的说明书 说几分钟就够了，但是从来没试过这么短时间的，我一般有的过夜有时候1个到几个小时，看自己时间的，有时间就让他多练一会。 我如果连接时间比较短，我一般是取一半来转化，另一半过夜连。 ...

受益匪浅呀！多谢仁兄！确实没有回收好，惭愧惭愧
赞一下 回复此楼
12楼2010-05-14 15:39:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不长斑是结果，可是导致这个结果的可能性太多了。连接转化做没做好，感受态效率是否高，培养基是否合适，抗生素是不是加多了·······每一步出问题了都会不长菌的。
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2010-05-14 16:23:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
确定一下抗生素是否加错了，再就是浓度是否正确。
其次，检查一下感受态细胞，最好从比较有名气的公司订购，或者以其公司的菌种自己制作感受态，我一直都是自己做感受态DH5a,转化效率也是蛮高的。注意做好后要先进行验证，阴性、阳性对照，计算一下转化效率等。
如果都没有问题，可能就是连接出现问题了，应该逐项仔细检查。我也有连接转化一个不长的时候，很郁闷。连接转化时也出现阳性对照长得很好，但是我的样品要么不长，要么长得很慢，与阳性不同步。呵呵，不过能找到你想要的就可以了~~

祝顺利噢~~~
赞一下(1人) 回复此楼
我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
14楼2010-05-14 16:32:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师
可能原因：1、感受态制备效果不好；
               2、要是转化用的是新连接产物（质粒），有可能连接效果很差；
               3、抗生素种类和浓度（按理说不会有这样低级错误发生吧！）。
赞一下 回复此楼
大家共同交流、共同提高！！！
15楼2010-05-16 12:38:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白兄

金虫 (小有名气)
感受态你们是买公司的？还是自己做啊？我们实验室是自己做的电转感受态
赞一下 回复此楼
时光如流水，匆匆而过。
16楼2010-05-16 12:44:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1.感受态细胞的问题  2.做链接转化时步骤出现问题
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2010-05-16 13:49:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoru2010 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:45 by Z9YWQ5EAO3qp
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:26 by Z9YWQ5EAO3qp
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 13:35 by C3vABopYbZJS
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +10 zju2000 2026-09-26 13/650 2026-09-30 10:26 by yexuqing
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:47 by yCO1Ll7aHtsw
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:37 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:03 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:04 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-29 13:56 by etmYJ6d2rquH
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭