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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助一个很奇怪的PCR现象
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1楼 2010-05-08 01:11:00
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
★
a4182009(金币+3):谢谢参与
问题没看懂 你要F1 R1的产物 用F1和R2配对干吗？
R1 R2没有序列我没办法帮你判断
两对引物要退火合适才行  你试试 AT*2+GC*4 把两对引物的数值比较一下 差2或不差就对了
注意不要算保护碱基在内 单指完全配对部分

模板的GC含量或宿主Genome的GC含量告诉我

菌液直接P？那把95度改到5min 热裂解一下

什么菌？ 大肠可以这么干，假单胞勉强可以，放线菌不行，分枝杆菌也不保证，还有些别的菌不列了
实在不行提个总DNA再P

PCR第一步是95度变性 不是退火 你程序怎么设的？最后一句也没看懂 什么叫加一个碱基就P不出来啊 加了这么多酶切位点？ 加一个减少一个它还就有p不出来的时候 PCR就是这么怪  酶切位点不算在内的 引物分析只算完全配对部分

原因很多 从你的描述就只能分析这些
有问题再联系
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Bemühen Sie !
19楼2010-05-08 16:43:04
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plantaqp

金虫 (正式写手)
★ ★
a4182009(金币+3):谢谢参与
1949stone(金币+1):谢谢 2010-05-08 11:18:46
PCR体系中加1-5%的甘油可以提高特异性。可以试试
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-05-08 04:14:53
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
a4182009(金币+3):谢谢参与
没看明白你的引物
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3楼2010-05-08 08:13:29
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★
a4182009(金币+3):谢谢参与
你R2的设计可能有问题
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4楼2010-05-08 08:54:40
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