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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 【分享】高人整理的细胞总蛋白的提取
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新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
多谢楼主，这些很有用！
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11楼2010-05-07 16:00:51
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Dwain

木虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
挺好的资源！
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12楼2010-05-14 20:41:01
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chachaxionga

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
学习学习
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13楼2010-06-09 13:11:20
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lilyxieyx

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
请问楼主，这些方法对链霉菌细胞内的蛋白提取适用吗？
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14楼2011-12-20 06:21:33
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小娟娟2011

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
很受益匪浅。谢谢楼主
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15楼2012-10-30 00:07:20
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1013826022

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
好资源，大家分享！
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16楼2013-12-25 13:43:28
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露的想念

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问这个PMSF是买裂解液的时候就有吗？还是要单独买？
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17楼2014-02-24 21:04:54
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Takano

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
单层贴壁细胞总蛋白的提取：
1、倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置
一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。
2、每瓶细胞加 3ml 4 度预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动1min
洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。将
PBS 弃净后把培养瓶置于冰上。
3、按 1ml 裂解液加10 ul PMSF（100mM），摇匀置于冰上。（PMSF要摇匀至无
结晶时才可与裂解液混合。）
4、每瓶细胞加400 ul 含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，为使细胞充分裂
解培养瓶要经常来回摇动。
5、裂解完后，用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快），然后用枪
将细胞碎片和裂解液移至1.5ml 离心管中。（整个操作尽量在冰上进行。）
6、于 4度下12000rpm 离心5min。（提前开离心机预冷）
7、将离心后的上清分装转移倒0.5min 的离心管中放于－20 度保存。
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加油吧！
18楼2015-08-15 22:10:04
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