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飘在海上的雪

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】引物设计 已有5人参与

各位虫虫好!我是分子生物学的新手,现在要克隆某个基因a。但是没有人做过,并且同属的也没有。有做过的,属于同一科的,我在设计引物的时候应该怎么办?我参考了这两个物种的其它基因序列,有70%的相似性,我该怎么办?
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xiangquanju

金虫 (小有名气)

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1949stone(金币+1): 2010-04-21 12:58
你是已经有这个基因的序列呢,还是不知道啊?
如果不知道这个基因的序列,可以分析一下这个基因在其他物种中的保守序列,可以用保守序列设计引物进行5‘或3’race,扩增出全长基因再进行测序
2楼2010-04-21 12:42:30
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

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amisking(金币+2): 2010-04-21 13:28
有同一个科的就很不错啦,我的只有同一个目的呢,如果你这个基因很保守,同一个目的都会有很高的同源性,很好设计的,手动设计比软件设计的效果还好。就按照你找到的这些序列来设计了,要比对,注意,一定要找一个模式生物的此基因的全长来比对,这样设计的引物好定位,扩出的核心序列也知道是从多少BP到多少BP了。等拿到核心序列后再设计5‘或3’race的引物,扩全长
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
3楼2010-04-21 13:06:41
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

你尽量找同一个目的吧
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
4楼2010-04-21 14:27:53
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434744419

金虫 (小有名气)


scelab(金币+1): 2010-04-21 23:46
先设计兼并引物 之后再用RACE
5楼2010-04-21 22:24:16
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chenyuqin

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
找保守序列,设计兼并引物,然后用RACE批全长
where there is a will,there ia a way.
6楼2010-04-22 10:33:37
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飘在海上的雪

木虫 (正式写手)

大于15000bp,希望大吗?并且比对了已研究的最近的一个物种的其它基因,只有70%的相似性。

[ Last edited by 飘在海上的雪 on 2010-4-22 at 10:46 ]
不在沉默中爆发,就在沉默着死亡!
7楼2010-04-22 10:36:59
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