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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】引物设计
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飘在海上的雪

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】引物设计 已有5人参与

各位虫虫好！我是分子生物学的新手，现在要克隆某个基因a。但是没有人做过，并且同属的也没有。有做过的，属于同一科的，我在设计引物的时候应该怎么办？我参考了这两个物种的其它基因序列，有70%的相似性，我该怎么办？
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不在沉默中爆发，就在沉默着死亡！
1楼 2010-04-21 11:17:23
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-04-21 12:58
你是已经有这个基因的序列呢，还是不知道啊？
如果不知道这个基因的序列，可以分析一下这个基因在其他物种中的保守序列，可以用保守序列设计引物进行5‘或3’race，扩增出全长基因再进行测序
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2楼2010-04-21 12:42:30
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
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amisking(金币+2): 2010-04-21 13:28
有同一个科的就很不错啦，我的只有同一个目的呢，如果你这个基因很保守，同一个目的都会有很高的同源性，很好设计的，手动设计比软件设计的效果还好。就按照你找到的这些序列来设计了，要比对，注意，一定要找一个模式生物的此基因的全长来比对，这样设计的引物好定位，扩出的核心序列也知道是从多少BP到多少BP了。等拿到核心序列后再设计5‘或3’race的引物，扩全长
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
3楼2010-04-21 13:06:41
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
你尽量找同一个目的吧
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
4楼2010-04-21 14:27:53
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434744419

金虫 (小有名气)
★
scelab(金币+1): 2010-04-21 23:46
先设计兼并引物 之后再用RACE
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5楼2010-04-21 22:24:16
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chenyuqin

新虫 (小有名气)
★
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找保守序列，设计兼并引物，然后用RACE批全长
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where there is a will,there ia a way.
6楼2010-04-22 10:33:37
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飘在海上的雪

木虫 (正式写手)
大于15000bp，希望大吗？并且比对了已研究的最近的一个物种的其它基因，只有70%的相似性。

[ Last edited by 飘在海上的雪 on 2010-4-22 at 10:46 ]
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不在沉默中爆发，就在沉默着死亡！
7楼2010-04-22 10:36:59
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