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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家一般用什么方法浓缩酶液或者蛋白质呢？
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melody-kh

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大家一般用什么方法浓缩酶液或者蛋白质呢？ 已有8人参与

如题，大家一般用什么方法浓缩蛋白质呢？纯化后的酶液体积很大，用透析袋和聚乙二醇20000浓缩后效果不是很理想
有没有用过冻干机浓缩的，用冻干机会对蛋白质活性或者酶活有影响吗？
还有其他比较好的方法吗？
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1楼 2010-04-18 20:57:37
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-19 00:16
melody-kh(金币+3):O(∩_∩)O谢谢 2010-04-19 09:09
超滤，就是用滤膜滤，水分等小分子可以透过，分子量大于半透膜的不能透过
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2楼2010-04-18 23:02:47
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wxd2006

★
1949stone(金币+1): 2010-04-20 15:58
超滤，就是用滤膜滤，水分等小分子可以透过，分子量大于半透膜的不能透过
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3楼2010-04-19 08:54:00
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melody-kh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2010-04-18 23:02:47:
超滤，就是用滤膜滤，水分等小分子可以透过，分子量大于半透膜的不能透过

是用的哪种超滤膜呢？生产厂家和价格 分别是多少呢？
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4楼2010-04-19 09:10:13
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月月大可

木虫 (著名写手)
melody-kh(金币+5):谢谢 2010-04-19 09:43
偶使用的是Millipore的超滤管，你可以按照蛋白分子量的大小选择超滤管的型号。超滤管上表的分子截留量都是按照球形蛋白计算的。我在使用的时候选择截留量是分子量的三分之一。
15ml型的每个管子的价格大约在60-70元之间，可能地区间有差异。可以重复使用。
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5楼2010-04-19 09:40:19
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melody-kh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-04-19 09:40:19:
偶使用的是Millipore的超滤管，你可以按照蛋白分子量的大小选择超滤管的型号。超滤管上表的分子截留量都是按照球形蛋白计算的。我在使用的时候选择截留量是分子量的三分之一。
15ml型的每个管子的价格大约在60-7 ...

用Millipore的超滤管，浓缩后总蛋白或者总酶活有损失吗？
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6楼2010-04-19 09:44:57
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
melody-kh(金币+2):谢谢 2010-04-19 10:29
melody-kh(金币+1):还想问一下，使用Millipore 超滤管 15ml的，要配套的离心机吗？你用的是哪种离心机呢？要低温离心机吗？ 2010-04-19 21:52
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-19 22:57
蛋白量损失肯定有，酶活性是否损失我不敢轻易下结论，但是我目前还没有听说那个人的蛋白使用超滤管后蛋白失活！
蛋白损失的多是和你使用管子类型有关，一般都在10%以内，怕损失可以选择截留量偏小一些的，但是浓缩的速度会变慢。
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7楼2010-04-19 09:58:17
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jingcp200320

银虫 (小有名气)
★
melody-kh(金币+1):thanks.但是，蔗糖能通过透析袋吧，这个有没有影响呢？ 2010-04-19 13:22
melody-kh(金币+1): 2010-04-19 13:23
1949stone(金币+1): 2010-04-20 15:59
如果没有超滤，透析袋可以。用40%蔗糖浓缩，一般1~2h既可体积减半。
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8楼2010-04-19 11:59:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
melody-kh(金币+2):thanks 2010-04-19 13:23
1949stone(金币+1): 2010-04-20 15:59
考虑millipore的管子
不过我们用冻干的方法都还挺好
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9楼2010-04-19 12:45:53
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melody-kh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-04-19 09:58:17:
蛋白量损失肯定有，酶活性是否损失我不敢轻易下结论，但是我目前还没有听说那个人的蛋白使用超滤管后蛋白失活！
蛋白损失的多是和你使用管子类型有关，一般都在10%以内，怕损失可以选择截留量偏小一些的，但是浓 ...

还想问一下，使用Millipore  超滤管 15ml的，要配套的离心机吗？你用的是哪种离心机呢？要低温离心机吗？
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10楼2010-04-19 21:52:54
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