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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白不表达
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kxxin66

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白不表达 已有5人参与

对以前表达良好的蛋白进行了一个位点的突变，在上游鉴定都正确的情况下转到BL21宿主菌中却不表达，换了载体后也没有任何表达。
   希望大侠能给学生指点一下，在此先谢过了！
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1楼 2010-04-18 14:38:29
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+5):感谢交流~~ 2010-04-18 19:07
是不是突变错了？出现了终止密码？或者是突变点的密码子是大肠杆菌极不喜好的密码子？？？？
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大家共同交流、共同提高！！！
2楼2010-04-18 15:45:42
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有可能是不表达了，密码子变换，有时候影响很大，不好说的
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3楼2010-04-19 13:48:19
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kxxin66

金虫 (小有名气)
没有出现终止子，或许向您所说的出现了非E.Coli喜好的密码子，可能真表的不出来了，但非常感谢你们的帮助！
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4楼2010-04-21 19:28:29
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freeboy77

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果只是密码子偏好问题，可尝试Ecoli Rosetta或Coden-Plus菌株
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5楼2010-04-21 19:43:25
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guoenwen

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我感觉点突变后的结果真是不好说的，有的时候对表达影响还挺大的，也没有系统的搜集这方面的实验资料。可以尝试一下密码子优化，换一下宿主菌或者载体也未尝不行。建议密码子优化后用AE宿主菌试一试。
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6楼2010-04-21 20:03:31
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