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pwj

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做westernblot时蛋白转不上 已有5人参与

最近做westernblot,用的是伯乐的湿转仪,转68左右的蛋白,转到PVDF膜上  总是转不上,我是恒压100V,1小时,滤纸用的是买仪器时附带的滤纸,上下各放了一张(因为滤纸比较厚)。转完了用丽春红染色5分钟,再放到自来水上冲却什么条带也没有,请用过伯乐湿转仪的帮忙分析下!!万分感谢
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308145157

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-16 18:34
建议点一个预染Marker,看看目的蛋白大小的条带是否能转过去
心若在,梦就在......
2楼2010-04-16 15:01:36
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pwj

银虫 (小有名气)

预染marker点了  也一点都看不到
3楼2010-04-16 16:23:49
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匿名

用户注销 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-04-16 18:35
本帖仅楼主可见
4楼2010-04-16 16:33:52
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lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-16 22:03
可能的原因:
1。你确定你的胶放在了负极面(黑色面)
2 PVDF  膜要先用甲醇活化,一般90s,
3 注意PVDF膜的正反面,你没转上的话,是不是把膜放反了~~
坚持能无数次改变人生的风景,因为只要路是对的,就不怕远~~~
5楼2010-04-16 18:36:43
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pwj

银虫 (小有名气)

好的!明天我再做做看看  谢谢大家了
6楼2010-04-16 21:58:55
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zhouyinggyf

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要确保胶、膜对应的正负极正确,最好加一个marker,转完膜后可以用考马斯亮蓝把胶染一下,看转的情况,也可以多转一会试试
7楼2010-04-16 22:18:25
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