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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做westernblot时蛋白转不上
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pwj

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做westernblot时蛋白转不上 已有5人参与

最近做westernblot，用的是伯乐的湿转仪，转68左右的蛋白，转到PVDF膜上  总是转不上，我是恒压100V，1小时，滤纸用的是买仪器时附带的滤纸，上下各放了一张（因为滤纸比较厚）。转完了用丽春红染色5分钟，再放到自来水上冲却什么条带也没有，请用过伯乐湿转仪的帮忙分析下！！万分感谢
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1楼 2010-04-16 14:09:42
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308145157

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-16 18:34
建议点一个预染Marker，看看目的蛋白大小的条带是否能转过去
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心若在，梦就在......
2楼2010-04-16 15:01:36
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pwj

银虫 (小有名气)
预染marker点了  也一点都看不到
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3楼2010-04-16 16:23:49
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匿名

用户注销 (著名写手)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 2010-04-16 18:35
本帖仅楼主可见
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4楼2010-04-16 16:33:52
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lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-16 22:03
可能的原因：
1。你确定你的胶放在了负极面（黑色面）
2 PVDF  膜要先用甲醇活化，一般90s，
3 注意PVDF膜的正反面，你没转上的话，是不是把膜放反了~~
赞一下(2人) 回复此楼
坚持能无数次改变人生的风景，因为只要路是对的，就不怕远~~~
5楼2010-04-16 18:36:43
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pwj

银虫 (小有名气)
好的！明天我再做做看看  谢谢大家了
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6楼2010-04-16 21:58:55
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zhouyinggyf

金虫 (正式写手)
★
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要确保胶、膜对应的正负极正确，最好加一个marker，转完膜后可以用考马斯亮蓝把胶染一下，看转的情况，也可以多转一会试试
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7楼2010-04-16 22:18:25
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