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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pET28a多克隆位点后面多个ATG哪个起始?
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xiangao

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】pET28a多克隆位点后面多个ATG哪个起始? 已有6人参与

如果我在多克隆位点BamHI 和HindIII 之间插入目的片段，而且含有起始密码子ATG,请问pET28a rbs后面这么多ATG,那从哪个开始翻译啊？ 谢谢回复
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1楼 2010-04-14 18:47:12
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
xiangao(金币+1): 2010-04-14 19:31
从NcoI那个ATG开始翻译
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2010-04-14 19:11:51
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xiangao

金虫 (正式写手)
那么编码出来的是一种蛋白吗？ 应该不全从第一个ATG开始吧？有没有偏爱哪一个？
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3楼2010-04-14 19:31:50
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
xiangao(金币+1): 2010-04-14 21:09
从第一个开始翻译，载体上不是已经翻译出对应的氨基酸序列了嘛。
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Thank-you，so-blue.
4楼2010-04-14 20:20:56
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yuanfeng

金虫 (小有名气)
xiangao(金币+1): 2010-04-14 21:10
从NcoI开始，前面的RBS序列和起始密码子之间的距离优化过的，这个距离应该表达效果最好。还有就是后面的那个His-tag，如果从NdeI开始，前面的的tag完全没用了。我想是这样的，个人意见。
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5楼2010-04-14 20:23:45
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
xiangao(金币+1): 2010-04-14 21:12
NcoI
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6楼2010-04-14 21:07:59
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muchong5577

金虫 (正式写手)
xiangao(金币+3):有不同意见就有讨论的余地 2010-04-15 12:00
不是从NcoI后面的ATG开始的，如果那样，那不是每个蛋白表达出来都带有his tag？我做过表达出来的就没有his tag的，后来是我设计引物，重新构建载体后表达的蛋白才有his tag的。
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7楼2010-04-14 23:58:14
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