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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于原核表达的问题
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beisimai895

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于原核表达的问题 已有3人参与

想请教做过原核表达的虫友，原核表达的时候，插入的目的基因是不是必须从起始密码子开始至终止密码子结束，如果需要酶切位点的话是不是直接在起始和终止密码子后加上就可以了？
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1楼 2010-04-13 23:20:37
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
★
beisimai895(金币+1):谢谢参与
你用的是什么载体，如果是pet系列的话，就不用取起始和终止密码子，因为载体上就有了。你只需要在选取的片段两端加上你要的酶切位点就好了
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2楼2010-04-14 19:34:43
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beisimai895

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by plantst5928 at 2010-04-14 19:34:43:
你用的是什么载体，如果是pet系列的话，就不用取起始和终止密码子，因为载体上就有了。你只需要在选取的片段两端加上你要的酶切位点就好了

选取的片段是说除去起始和终止密码子剩下的部分吗？如果密码子是载体带的话，那在选取片段前加酶切位点，不是在起始密码子和片段之间又引入了其它的序列吗？
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3楼2010-04-15 09:13:22
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
beisimai895(金币+1):谢谢参与
常用的是PET系统，其他的也一样的，前面肯定要有信号肽啊～呵呵，后面的话，你的酶切位点后应该有TAA的stop codon ，OK，再有就是注意你的阅读框架，原核表达定性，纯化不建议，因为原核的蛋白包装折叠太复杂，现在很难纯化，有的连表达也很难，希望对你有帮助
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4楼2010-04-15 16:20:35
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