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plantst5928

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于质粒拷贝数的问题 已有3人参与

我最近在做一个点突变的实验,先用一个空载体连接一个目的基因,然后需要在目的基因的指定位点制作点突变,我用的是trangen的fastpfu点突变试剂盒,做完之后测序结果发现确实是在指定位点突变了,达到了预期目的。
但是奇怪的事情也发生了:我的空载体和连接目的基因的质粒都是高拷贝的,提出质粒来很亮,但是点突变之后的菌液提质粒就非常的弱,但是可以保证提出来了,因为测序以及pcr都能说明。提质粒的手法也保证没问题。这个实验我已经重复了2次,结果都是这样。我怀疑是菌老了,就重新划线转接,但是无济于事。请问大家问题可能出在哪里??
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j2

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
难道是点突变造成的???
修炼ing,当虫仙……
2楼2010-04-12 12:31:08
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银杏下

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
复制起始位点扩增时发生突变?很有可能。
3楼2010-04-12 14:00:21
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plantst5928

铜虫 (小有名气)

你的意思是复制子发生了突变导致了拷贝数的减少?那复制子的启动强弱和它的结构之间有什么具体的关系呢?
4楼2010-04-12 18:50:15
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